基孔肯雅熱疫情突襲
近期，廣東佛山出現(xiàn)一起輸入引起的基孔肯雅熱疫情。截至7月20日，佛山全市累計(jì)報(bào)告確診病例2285例。
信息來源：南方都市報(bào)
什么是基孔肯雅熱？
基孔肯雅熱是由基孔肯雅病毒（CHIKV）引起，通過伊蚊（俗稱花斑蚊）叮咬傳播的急性傳染病，各年齡段人群都有可能感染發(fā)病。健康人被帶毒蚊子叮咬后，病毒將在人體內(nèi)潛伏1到12天，一般為3到7天。
病毒通過受感染蚊蟲叮咬侵入人體后，啟動(dòng)皮膚感染階段（圖1）。首先感染皮膚駐留細(xì)胞，包括：真皮巨噬細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、間充質(zhì)基質(zhì)細(xì)胞、朗格漢斯細(xì)胞等并在這些細(xì)胞內(nèi)完成初期復(fù)制。后續(xù)病毒擴(kuò)散至全身從而出現(xiàn)病癥（圖2）。
圖1.基孔肯雅病毒感染機(jī)制：皮膚感染階段
圖2.基孔肯雅病毒感染機(jī)制：全身擴(kuò)散與癥狀演變
急性期(發(fā)病后0-10天):典型表現(xiàn)為突發(fā)高熱(39℃以上)、劇烈關(guān)節(jié)痛和皮疹。關(guān)節(jié)疼痛呈對(duì)稱性，主要累及腕、踝和指間關(guān)節(jié)，嚴(yán)重時(shí)導(dǎo)致活動(dòng)障礙，約80%患者因此無法完成日常活動(dòng)。皮疹通常在發(fā)熱后2-5天出現(xiàn)，多為斑丘疹（圖3），先見于軀干后蔓延至四肢。此期常伴肌痛、頭痛、惡心和極度乏力，部分患者出現(xiàn)淋巴結(jié)腫大。
慢性期(>3個(gè)月):約30-40%患者發(fā)展為慢性基孔肯雅關(guān)節(jié)炎（圖4），癥狀可持續(xù)數(shù)月甚至數(shù)年。腕關(guān)節(jié)和踝關(guān)節(jié)最常受累，影像學(xué)可見關(guān)節(jié)侵蝕性改變，類似類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎。老年患者、 HLA-B27陽性者及存在基礎(chǔ)關(guān)節(jié)疾病者更易遷延為慢性。
圖3.急性感染期出現(xiàn)斑丘疹
圖4.慢性基孔肯雅關(guān)節(jié)炎
盡管基孔肯雅病毒已在多地區(qū)呈地方性流行，但目前國(guó)內(nèi)尚無已上市可用疫苗。
迪福潤(rùn)絲生物助力基孔肯雅熱病毒（CHIKV）創(chuàng)新藥研發(fā)，提供整合型解決方案
基孔肯雅熱假病毒中和抗體檢測(cè)
迪福潤(rùn)絲生物提供基于CPE法的中和抗體檢測(cè)服務(wù)（圖5），該檢測(cè)方法靈敏度高、檢測(cè)迅速，并且該實(shí)驗(yàn)方法的特異性、重復(fù)性均能滿足中和實(shí)驗(yàn)的要求，適用于高通量樣本的檢測(cè)。
圖5. 基孔肯雅熱假病毒中和抗體檢測(cè)流程圖
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服務(wù)內(nèi)容
表2.CHIKV血清中和抗體檢測(cè)服務(wù)
針對(duì)基孔肯雅熱假病毒的蛋白酶抑制劑篩選
新型基孔肯雅熱病毒蛋白酶抑制劑的發(fā)現(xiàn)對(duì)于抗基孔肯雅熱病毒藥物研發(fā)至關(guān)重要，其蛋白酶抑制劑靶點(diǎn)為nsP2半胱氨酸蛋白酶。在大量化合物中尋找CHIKV蛋白酶抑制劑的過程中，行業(yè)急需一種可實(shí)現(xiàn)無需活病毒參與的細(xì)胞水平的正向篩選方式，以助力新藥研發(fā)。
由迪福潤(rùn)絲生物獨(dú)家開發(fā)的蛋白酶抑制劑篩選系統(tǒng)，可在細(xì)胞水平直接模擬病毒自然感染過程，杜絕漏篩和假陽性等情況。我們以檢測(cè)和篩選SARS—COV—2藥物為例，展示迪福潤(rùn)絲生物開發(fā)的蛋白酶抑制劑篩選系統(tǒng)的一系列優(yōu)勢(shì)：
1）最簡(jiǎn)便
肉眼觀測(cè)
DIFF蛋白酶抑制劑篩選系統(tǒng)可通過肉眼直接觀察藥物反應(yīng)的熒光變化（圖6），進(jìn)行定性判斷。
圖6. SARS—COV—2陽性藥物GC376添加不同濃度SARS—COV—2的3CL蛋白酶抑制劑后24h,48h,72h細(xì)胞GFP表達(dá)情況
2）最準(zhǔn)確
原理可靠
本系統(tǒng)基于特制質(zhì)粒的共表達(dá)機(jī)制，以SARS—COV—2為例，結(jié)合重組綠色熒光蛋白（rGFP）和SARS—COV—2的3CL蛋白酶。在該系統(tǒng)中，rGFP序列中嵌入了3CL蛋白酶的特異性切割位點(diǎn)。當(dāng)3CL蛋白酶功能正常時(shí)，會(huì)特異性裂解rGFP，導(dǎo)致其熒光功能喪失，熒光強(qiáng)度減弱。相反，當(dāng)抑制劑有效抑制了3CL蛋白酶的活性時(shí)，rGFP無法被切割，維持其完整性并正常發(fā)出熒光，熒光強(qiáng)度增強(qiáng)（圖7）。藥物有效性與熒光強(qiáng)度成正相關(guān)，是一種更直觀的正向篩選方式。
圖7. DIFF蛋白酶抑制劑篩選系統(tǒng)原理圖
結(jié)果準(zhǔn)確
系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果與真病毒檢測(cè)結(jié)果高度一致。使用活病毒進(jìn)行檢測(cè)，GC376的IC50值為4.69μM；而采用DIFF篩選系統(tǒng)，IC50值為6.44μM，兩種方法測(cè)得的IC50值高度相近（圖8）。
圖8. 使用活病毒和DIFF篩選系統(tǒng)測(cè)得的IC50值
圖9. 添加不同濃度SARS—COV—2蛋白酶抑制劑72h后熒光檢測(cè)值
3）可進(jìn)行高通量篩選
系統(tǒng)檢測(cè)的熒光值低而信噪比好，可聯(lián)合現(xiàn)有藥物庫，一周即可篩選1-10萬個(gè)基孔肯雅熱病毒藥物候選化合物，快速鎖定有效藥物（圖10）。
圖10. 高通量篩選操作示意圖
參考文獻(xiàn)：
1. Burt FJ, Chen W, Miner JJ, et al. Chikungunya virus: an update on the biology and pathogenesis of this emerging pathogen. Lancet Infect Dis. 2017 Apr;17(4):e107-e117.
2. Bartholomeeusen K, Daniel M, LaBeaud DA, et al. Chikungunya fever. Nat Rev Dis Primers. 2023 Apr 6;9(1):17.
3. Cherian N, Bettis A, Deol A, et al.Strategic considerations on developing a CHIKV vaccine and ensuring equitable access for countries in need. NPJ Vaccines. 2023 Aug 18;8(1):123.
4. Stumpf MM, Brunetti T, Davenport BJ, et al. Deep mutationally scanned CHIKV E3/E2 virus library maps viral amino acid preferences and predicts viral escape mutants of neutralizing CHIKV antibodies. J Virol. 2025 Apr 15;99(4):e0008125.
5.基孔肯雅熱急診診療與防控策略：急診醫(yī)生實(shí)戰(zhàn)手冊(cè)（2025最新版）