癌癥是伴侶動物（如犬和貓）疾病相關(guān)死亡的首要原因。盡管診斷與治療手段不斷進步，但整體療效仍未取得顯著改善。近年來，一種新興的療法——溶瘤病毒（Oncolytic Viruses, OVs）治療，正在寵物腫瘤治療領(lǐng)域展現(xiàn)出巨大潛力。溶瘤病毒能夠選擇性地感染并裂解癌細胞，同時激發(fā)抗腫瘤免疫應(yīng)答，而對健康組織損傷較小。
早在2006年，《Cancer Biotherapy and Radiopharmaceuticals》期刊上就發(fā)表了一篇有關(guān)犬用溶瘤病毒體內(nèi)實驗研究的文章《Administration of a Conditionally Replicative Oncolytic Canine Adenovirus in Normal Dogs》。
骨肉瘤是犬類最常見的原發(fā)性骨腫瘤。約75%為肢體末端腫瘤，常見于大型和巨型犬。犬骨肉瘤的病因目前尚未明確。然而，其發(fā)病機制被認(rèn)為與多種細胞周期及生長因子相關(guān)基因（如p53、RB、IGF-1和IGF-1R等）及其蛋白產(chǎn)物的遺傳調(diào)控異常密切相關(guān)。
轉(zhuǎn)移極為常見，最常發(fā)生的轉(zhuǎn)移部位為肺部。若不進行干預(yù)，患病動物的中位生存時間為6個月或更短，死亡通常歸因于轉(zhuǎn)移性疾病。治療方式包括姑息性截肢或保肢手術(shù)聯(lián)合化療，但化療僅能將中位生存期延長約6-8個月。
圖1.目前對于患有骨肉瘤的寵物犬，截肢是避免腫瘤惡化的治療選擇之一
圖片來源：qingfengwanm20
研究團隊基于犬腺病毒2型（CAV-2），開發(fā)了一種"同源"（syngeneic）條件復(fù)制性腺病毒（CRAd），通過轉(zhuǎn)錄水平靶向改造使其特異性作用于犬骨肉瘤（Osteosarcoma, OS）細胞。同時，研究者系統(tǒng)性評估了骨肉瘤靶向CAV-2 CRAd在健康犬只體內(nèi)給藥的效果與安全性。
在實驗中，6只2-3歲混種實驗犬接受病毒注射，并在BSL-2級設(shè)施中進行隔離飼養(yǎng)。所有犬均按規(guī)范接種多聯(lián)疫苗（其中包括CAV-2源性肝炎疫苗，可交叉免疫CAV-1）。實驗前檢測CAV-2抗體基線，其中3只犬（1-I、2-I、3-I）在病毒注射前3天起口服環(huán)磷酰胺（50 mg/m²/日）進行免疫抑制，而犬只1、2和3則保持正常免疫功能。所有樣本采用標(biāo)準(zhǔn)臨床方法檢測，CAV-2滴度通過血清中和試驗評估，以細胞病變效應(yīng)為判定標(biāo)準(zhǔn)（圖2）。
圖2.血清中和試驗檢測6只實驗犬在接受CAV-2源性條件復(fù)制性腺病毒?（CAV-2-based Conditionally Replicative Adenovirus, CRAd）注射前后的抗體水平變化
通過每日PCR對全血、血漿、尿液和糞便樣本進行病毒定量檢測，結(jié)果顯示：犬1-I糞便24小時呈低拷貝數(shù)陽性（2.8拷貝/克），犬2糞便72小時拷貝數(shù)升高至59.8拷貝/克，犬3和3-I尿液分別檢出51拷貝/微升（24小時）和22拷貝/微升（96小時）。血漿與全血樣本（圖3）中病毒DNA持續(xù)存在48小時以上，部分可持續(xù)至96小時，但免疫抑制組與正常組間病毒濃度無統(tǒng)計學(xué)顯著差異。
圖3.血漿中犬腺病毒2型（CAV-2）源性條件復(fù)制性腺病毒（CRAd）定量分析
尸檢組織qPCR分析（圖4）顯示脾臟病毒載量最高（5/6例），肝臟次之（2/6例），其中犬3-I因DNA回收量低可能存在人為偏差；肺組織（犬2、2-I）呈低水平陽性，其余心、腎、腦等組織僅檢出微量病毒DNA。
圖4.組織中CAV-2源性條件復(fù)制性腺病毒（CRAd）定量結(jié)果
這項短期研究在健康犬中評估了CAV-2源性條件復(fù)制腺病毒（CRAd）的初步安全性，結(jié)果顯示未出現(xiàn)任何明顯毒性癥狀。血液循環(huán)中CRAd DNA的存在至少持續(xù)48小時，提示病毒在體內(nèi)具有良好的穩(wěn)定性，為其靶向感染播散性腫瘤提供了可能。未來還可開展長期研究，以評估潛在的長期影響，如骨重塑或組織修復(fù)的變化。
目前的研究結(jié)果對CRAd在犬癌癥治療中的應(yīng)用具有重要啟示：短期免疫抑制并未增加不良事件風(fēng)險，同時理論上為循環(huán)病毒提供了更多時間去感染、復(fù)制并擴散到腫瘤組織，為溶瘤病毒藥物研發(fā)提供了可靠依據(jù)，也為未來動物腫瘤治療策略的優(yōu)化奠定了基礎(chǔ)。
迪福潤絲生物溶瘤病毒候選株構(gòu)建服務(wù)
迪福潤絲生物在溶瘤病毒藥物的臨床前研究方面具備系統(tǒng)化平臺能力。公司通過對病毒株基因組進行改造，以提升溶瘤病毒的抗腫瘤活性。目前，公司可改造的溶瘤病毒載體涵蓋新城疫病毒（NDV）、水皰性口炎病毒（VSV）、單純皰疹病毒（HSV-1）等，已建立起多種類型的小鼠腫瘤模型，可為不同腫瘤提供系統(tǒng)性的溶瘤病毒有效性評價服務(wù)。
服務(wù)內(nèi)容：
服務(wù)案例：
圖5. 以NDV為載體的改造溶瘤病毒候選株（NDV-OV1,NDV-OV2,NDV-OV3）給藥后，成瘤小鼠腫瘤體積變化。A:LLC成瘤小鼠；B:B16F10成瘤小鼠。
圖6. 以VSV為載體的改造溶瘤病毒候選株(VSV-OV1)給藥后，成瘤小鼠腫瘤體積變化。A:LLC成瘤小鼠；B:B16F10成瘤小鼠。
DIFF溶瘤病毒平臺核心優(yōu)勢：
基于迪福潤絲反向遺傳操作技術(shù)平臺（Viraltech Architect），可對絕大部分病毒進行基因工程改造。平臺通過模塊化的DCVL（Design-Construct-Verify-Learn）的方式，進行實驗數(shù)據(jù)積累與更新迭代。
DIFF NDV載體優(yōu)勢：
DIFF VSV載體優(yōu)勢：
迪福潤絲生物依托全球領(lǐng)先的重組病毒載體技術(shù)平臺，為溶瘤病毒療法提供全流程CRO專業(yè)支持：從溶瘤病毒候選株構(gòu)建（如新城疫病毒NDV、水皰性口炎病毒VSV載體等）、到動物模型藥效評價以及活體成像分析。公司擁有杭州唯一一家專注于P2病毒類動物模型評價的企業(yè)實驗室，加速創(chuàng)新療法從實驗室向臨床轉(zhuǎn)化，助力企業(yè)IND申報成功！
參考文獻：
Zhao X, Li W, Sun Y, Ma J. Oncolytic senecavirus A in tumor immunotherapy: Mechanisms, progress, and future directions. Virology. 2025 Feb;603:110338.
Smith BF, Curiel DT, Ternovoi VV, et al. Administration of a conditionally replicative oncolytic canine adenovirus in normal dogs. Cancer Biother Radiopharm. 2006 Dec;21(6):601-6.
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