細胞功能的核心執行者最終是蛋白質分子。由于存在復雜的轉錄后調控機制,mRNA與對應蛋白質的表達水平往往存在差異,這意味著僅通過mRNA檢測并不能準確反映細胞內實際的蛋白豐度。這種生物學特性凸顯了轉錄組聯合蛋白質數據分析的重要性。
CITE-seq技術作為單細胞多組學研究的重要突破,在傳統單細胞轉錄組測序基礎上,創新性地整合了細胞表面蛋白的同步檢測功能。該技術通過特異性抗體標記系統,能夠在單細胞分辨率下實現轉錄組與表面蛋白質組的聯合解析。
單細胞轉錄組的基礎上,增加單細胞膜蛋白檢測的優勢有哪些?
1. 單細胞轉錄組+膜蛋白,助力發現更精細亞群
CITE-seq技術能夠在同一個細胞中同時檢測mRNA和細胞表面膜蛋白的信息,提供了比傳統單細胞RNA測序更豐富的數據,能夠更清晰地鑒別細胞類型,甚至可以注釋到罕見細胞類型和發現新的細胞亞群。

2. 單細胞轉錄組+膜蛋白,更全面的細胞Marker表達解析
mRNA和蛋白的表達并不總是一致的,如PD1 mRNA表達量通常很低,而Abseq可以高水平的檢測到PD1蛋白表達。單細胞多組學通過不同維度的表達分析,更全面、更利于闡明細胞marker表達機制。

t-SEN圖展示CD4,δTCR,PD1在mRNA和蛋白水平的表達
CITE-seq一次可以測多少種膜蛋白?
在檢測通量方面,CITE-seq技術理論上具備無上限的抗體檢測容量,突破了流式細胞術的熒光通道限制和質譜流式的同位素標簽瓶頸。然而實際應用中,考慮到抗體交叉反應、檢測成本等因素,當前研究多采用蛋白檢測組合(Panel)的模式。目前已推出的單細胞CITE-seq的Panel包括:T細胞蛋白panel(30 markers),B細胞蛋白panel(30 markers),以及人免疫蛋白panel(30 markers)。此外,NK細胞蛋白panel、Tumor蛋白panel、APC蛋白panel正在陸續上市中,各panel也可相互組合,旨在助力不同專項領域單細胞研究。

1. T細胞蛋白panel(30 markers)
在免疫學研究中,T細胞作為免疫系統的核心效應細胞,其功能解析對揭示免疫應答機制及疾病診療具有關鍵作用。然而單細胞轉錄組分析顯示,不同T細胞亞群在RNA層面的標志基因表達存在高度重疊,導致傳統基于單一轉錄組數據的T細胞亞群注釋相對困難。針對這一瓶頸,基于BD OMICS-One T panel,通過CITE-seq技術整合30種T細胞關鍵表面蛋白標志物的檢測體系,將單細胞RNA測序與膜蛋白檢測相結合,不僅能夠突破單一組學的分析局限,更通過基因表達與蛋白翻譯層面的協同驗證,系統揭示T細胞亞群異質性及其在免疫調控中的分子機制,為精準解析T細胞功能動態提供了創新性研究工具。
T panel 30 Markers list:

基于T panel的30個Markers解析T細胞亞群及活化狀態:

2. B細胞蛋白panel(30 markers)
在B細胞發育研究中,不同發育階段的B細胞呈現獨特的表面受體和胞內信號分子表達譜。B細胞表面有多種膜表面蛋白,籍以識別抗原、與免疫細胞和免疫分子相互作用,也是分離和鑒別B細胞的重要依據。BD OMICS-One B panel整合30種B細胞特征性膜蛋白標志物,通過CITE-seq技術可創新性地建立單細胞轉錄組與表面蛋白組的多模態分析策略,同時捕獲RNA與細胞表面膜蛋白,不僅實現B細胞亞群的高分辨率分型,更能動態追蹤其活化/抑制狀態轉換中的調控樞紐基因,助力B細胞發育研究。
B panel 30 Markers list:

基于B panel的30個Markers解析B細胞亞群

3. 人免疫蛋白panel(30 markers)
Immune Panel 30 Markers list:
人免疫蛋白panel集合了30種針對人主要特異性免疫標志物的抗體,每個抗體所標記的表面蛋白與相應的免疫細胞亞群高度匹配。單細胞蛋白組學的應用有助于發現精細亞群、功能靶標、特征Marker,也有助于連接單細胞和流式的聯用。

單細胞轉錄組聯合膜蛋白數據對細胞聚類分群更有優勢:

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