在分子生物學(xué)研究的日常工作中，PCR 是最常用也最關(guān)鍵的實(shí)驗(yàn)技術(shù)之一。從基礎(chǔ)的DNA 片段擴(kuò)增，到復(fù)雜的基因克隆、突變分析、測序驗(yàn)證，PCR的準(zhǔn)確性和效率直接決定了后續(xù)實(shí)驗(yàn)的成敗。
然而，實(shí)驗(yàn)人員往往面臨著各種挑戰(zhàn)：
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模板復(fù)雜，擴(kuò)增效率低；
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長片段難以獲得，易出現(xiàn)片段丟失；
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擴(kuò)增時(shí)間過長，影響整體實(shí)驗(yàn)進(jìn)度；
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錯配與突變頻率高，影響數(shù)據(jù)可靠性。
科研人員常常感嘆：“PCR才是最考驗(yàn)科研人耐心的環(huán)節(jié)。”
為了幫助大家解決這一系列難題，近岸蛋白重磅推出新一代高保真PCR預(yù)混液——2×NovoFast HiFi Master Mix (Quick Load)（Cat.No.:E185）。它不僅在保真度上達(dá)到100倍提升，更能輕松擴(kuò)增長達(dá)40 kb的復(fù)雜基因模板，最快擴(kuò)增速度可達(dá)1s/kb，可擴(kuò)增GC含量高達(dá)82.8%的片段，同時(shí)對PCR抑制劑具有良好的抵抗能力，適用于1%-20%全血、鼠尾裂解、腐殖酸、細(xì)菌等樣本的直接PCR，為復(fù)雜樣本PCR提供可靠解決方案。
五大核心優(yōu)勢
保真性高：保真度為普通Taq酶的100倍
快速高效：2 kb以下片段，延伸速度快至1s/kb
長片段擴(kuò)增：λDNA、人gDNA擴(kuò)增可達(dá)40kb
靈敏性高：可擴(kuò)增低至1pg的λDNA
穩(wěn)定強(qiáng)：室溫放置24h，性能不變
性能展示
1 高保真性達(dá)100倍
圖1. 采用二代測序方法，測定不同聚合酶的擴(kuò)增保真度。結(jié)果顯示， 2×NovoFast HiFi Master Mix (Quick Load) 保真度是Taq DNA Polymerase的100倍。
2 快速長片段擴(kuò)增
復(fù)雜模板快速長片段擴(kuò)增
圖2. 20μl擴(kuò)增體系中，以Human gDNA為模板，擴(kuò)增1 kb-40 kb片段。結(jié)果顯示，E185擴(kuò)增性能優(yōu)異，擴(kuò)增速度快，2 kb以內(nèi)片段延伸速度可達(dá)1s/kb，20 kb以內(nèi)片段延伸速度可達(dá)5s/kb。（泳道MK：DNA Ladder 10000，Cat.No.: DM033）
簡單模板快速長片段擴(kuò)增
圖3. 20μl擴(kuò)增體系中，以λDNA為模板，擴(kuò)增500 bp-40 kb片段。結(jié)果顯示，E185擴(kuò)增性能優(yōu)異，擴(kuò)增速度快，2 kb以內(nèi)片段延伸速度可達(dá)1s/kb，20 kb以內(nèi)片段延伸速度可達(dá)5s/kb。（泳道MK1：DNA Ladder 2000，Cat.No.: DM005；泳道MK2：DNA Ladder 10000，Cat.No.: DM033）
3 兼容多種特殊樣本擴(kuò)增
1%-20%全血
圖4. 以1%-20%全血為模板，擴(kuò)增2 kb片段。結(jié)果顯示，E185擴(kuò)增性能優(yōu)異，兼容不同血液模板。（泳道MK：DNA Ladder 2000 Plus，Cat.No.: DM006）
菌落直擴(kuò)
圖5. 以大腸桿菌菌落為模板，挑取單菌落擴(kuò)增2 kb片段。結(jié)果顯示，E185擴(kuò)增性能優(yōu)異，兼容菌落直擴(kuò)。（泳道MK：DNA Ladder 2000 Plus，Cat.No.: DM006）
鼠尾裂解液直擴(kuò)
圖6. 以鼠尾裂解液為模板，擴(kuò)增2 kb片段。結(jié)果顯示，E185擴(kuò)增性能優(yōu)異，兼容鼠尾直擴(kuò)。（泳道MK：DNA Ladder 2000 Plus，Cat.No.: DM006）
腐殖酸抗性
圖7. 以Human gDNA為模板，添加不同濃度腐殖酸，擴(kuò)增1 kb片段。結(jié)果顯示，E185擴(kuò)增性能優(yōu)異，兼容0.05%-0.08%腐殖酸模板。（泳道MK：DNA Ladder 2000，Cat.No.: DM005）
4 片段GC含量最高可達(dá)82.8%
圖8. 以Human gDNA為模板，擴(kuò)增不同GC含量片段。結(jié)果顯示，E185擴(kuò)增性能優(yōu)異，兼容不同GC含量片段擴(kuò)增，特異性高。（泳道MK：DNA Ladder 2000，Cat.No.: DM005）
5 靈敏性最低可達(dá)1pg
圖9. 以λDNA為模板，擴(kuò)增4 kb片段。結(jié)果顯示，E185靈敏度可達(dá)1pg。（泳道MK：DNA Ladder 2000 Plus，Cat.No.: DM006）
6 穩(wěn)定性強(qiáng)
圖10. 加熱穩(wěn)定性、室溫穩(wěn)定性和凍融穩(wěn)定性測試。結(jié)果顯示，E185在37℃條件下放置7天性能穩(wěn)定，室溫放置24h性能穩(wěn)定，反復(fù)凍融20次性能穩(wěn)定。（FTC0：凍融0次；FTC20：凍融20次）
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