輔助性T細胞17（T helper 17 cell, Th17）作為一類獨特的CD4+T細胞亞群，最顯著的特點是分泌IL-17家族細胞因子。Th17的特異性轉(zhuǎn)錄因子為RORγt/RORC2，區(qū)別于T-bet（Th1）和GATA3（Th2），其獨特定位功能為抗真菌/胞外菌+驅(qū)動自身免疫和慢性炎癥，它自2005年被發(fā)現(xiàn)以來便成為免疫研究的熱點。
Th17細胞研究速報
Th17細胞與自身免疫疾病
2025年5月，北京協(xié)和醫(yī)院風(fēng)濕免疫科李夢濤主任團隊與浙江大學(xué)楊雋研究員團隊合作，揭示了Activin A/ALK4信號通路在Th17細胞和肺血管內(nèi)皮細胞中的雙重作用機制，為紅斑狼瘡相關(guān)肺動脈高壓的治療提供了新靶點。
研究團隊設(shè)計了Th17細胞與肺血管內(nèi)皮細胞共培養(yǎng)體系，發(fā)現(xiàn)當(dāng)Th17細胞過表達Activin A的受體ALK4時，可強力誘導(dǎo)內(nèi)皮細胞發(fā)生內(nèi)皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化——這是肺血管重塑的核心病理過程[1]。
Th17與Treg細胞療法
四川大學(xué)華西醫(yī)院張敦房研究員團隊的突破性研究，揭示了過繼性Treg細胞治療會促進致病性Th17細胞的分化和積累，進而影響Treg細胞治療的療效，并且提出了創(chuàng)新性治療方案——在輸注Treg細胞的同時阻斷IL-6/STAT3信號通路。這種聯(lián)合治療策略可通過抑制Treg細胞介導(dǎo)的致病性Th17細胞分化，顯著提升Treg細胞治療的療效[2]。
腸道Th17細胞的新發(fā)現(xiàn)
浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院蔡志堅/沈穎穎團隊的研究發(fā)現(xiàn)了新的誘導(dǎo)腸道Th17細胞生成的細菌——糞產(chǎn)堿菌。
值得注意的是，糞產(chǎn)堿菌在人類生活環(huán)境中的普遍存在，團隊發(fā)現(xiàn)該菌在成人糞便的檢出率高達86%（86/100），而此前被認為是誘導(dǎo)腸道Th17細胞主要細菌的分節(jié)絲狀菌在成人糞便中的檢出率為0%（0/100）[3]。
Th17體外誘導(dǎo)關(guān)鍵因子
Th17 細胞在人和小鼠中的分化路徑[4]
Th17細胞體外培養(yǎng)方案
PBMC分離與收集
利用密度梯度離心液將全血樣本中的PBMC離心出來
Naive T細胞分選
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1 使用CD4+ Naive T細胞分選試劑標(biāo)記PBMC。一般來說，需在4℃下孵育20-30 min。
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2 加入鏈霉親和素（Streptavidin）偶聯(lián)的磁珠，在4℃下繼續(xù)孵育20-30 min。
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3 將孵育用的U型管置于專用磁力架上，室溫靜置5 min。
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4 將管中的細胞導(dǎo)入新的U型管中，即為Naive T細胞。
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5 為確保純度，可以重復(fù)分選步驟。
Th17誘導(dǎo)分化培養(yǎng)
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1 使用PBS稀釋抗CD3(Cat.No.:GMP-A018)和抗CD28抗體(Cat.No.:GMP-A063），稀釋至工作濃度分別5-10 µg/mL和5-10 µg/mL。
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2 按照1 mL/孔加稀釋后的抗CD3/CD28抗體至24孔板，37℃細胞培養(yǎng)箱中孵育60 min（在4℃過夜孵育效果更佳）。
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3 使用PBS將包被后的孔清洗兩次。
注意：也可使用抗CD3/CD28磁珠(Cat.No.:GMP-B016)進行激活，在細胞鋪板時，按照磁珠和細胞1:1的比例進行混合即可。
Expansion of the human PBMCs. Cells were stimulated with Anti- Human CD3/CD28 Beads (Cat.No.:GMP-B016) , and expanded with human IL-2 (Cat.No.:C013) for 14 days.(Data were kindly provided by Novoprotein's customer. Thanks for her contribution)
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4 配置Th17分化培養(yǎng)基（Th17-DM）
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RPMI 1640完全培養(yǎng)、β-巰基乙醇 (50 μM)
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細胞因子
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抗體： 抗人IFN-γ抗體 (10 μg/mL) + 抗人IL-4抗體 (10 μg/mL)
注意：成分確定的T細胞無血清培養(yǎng)基可以替代RPMI 1640完全培養(yǎng)基（含血清），該類培養(yǎng)基的批次穩(wěn)定性較含血清培養(yǎng)基要好。
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5 使用Th17-DM重懸分選后的Naive T細胞，將濃度調(diào)整以2×105 cells/mL。
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6 按照1 mL/孔的量加入已包被抗CD3/CD28抗體的24孔板中，在37℃，5%CO2的環(huán)境下持續(xù)培養(yǎng)7天。每1~2天進行半換液。
Th17細胞鑒定
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1 取部分Th17細胞，用含有50 ng/mL PMA的Th17-DM重懸，并于細胞培養(yǎng)箱中孵育1 h。
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2 加入3.0 μM蛋白轉(zhuǎn)運抑制劑Monensin，繼續(xù)培養(yǎng)3 h。
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3 使用流式細胞術(shù)對細胞進行鑒定。
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4 胞外標(biāo)志物：CD4、TGF-βR、IL-6 Rα、IL-21R、IL-23R
胞內(nèi)/核內(nèi)標(biāo)志物：IL-17A、RORα/NR1F1、RORγt/RORC2/NR1F3
Th17相關(guān)產(chǎn)品推薦
近岸蛋白提供T細胞體外激活培養(yǎng)以及Th17細胞分化的所需的抗體、人源和鼠源細胞因子，包括IL-2、IL-1β、IL-6、IL-23、TGF-β1、抗CD3抗體、抗CD28抗體等，并能提供批間穩(wěn)定一致的GMP級產(chǎn)品，支持向臨床無縫過渡轉(zhuǎn)化。
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參考文獻
[1]Jing S, Qian J, Ying H, et al. Activin A-Activated ALK4 Induces Pathogenic Th17-Involved Endothelial-Mesenchymal Transition in Systemic Lupus Erythematosus-Associated Pulmonary Arterial Hypertension. Arthritis Rheumatol. 2025;77(11):1533-1547.
[2]Cheng H, Nan F, Ji N, et al. Regulatory T cell therapy promotes TGF-β and IL-6-dependent pro-inflammatory Th17 cell generation by reducing IL-2. Nat Commun. 2025;16(1):7644.
[3]Shen Y, Ma Z, Wang H, et al. Alcaligenes faecalis induces intestinal T helper-17 cells by enhancing Rorc transcription through E3 ligase Trim21-mediated Fbxw7 degradation. Immunity. 2025;58(6):1469-1483.e8.
[4]McGeachy MJ, Cua DJ. Th17 cell differentiation: the long and winding road. Immunity. 2008;28(4):445-453.