細胞培養(yǎng)的污染始終是困擾各位研究者的難題。嚴重的污染不僅讓數(shù)周的辛苦付諸東流，更可能導致實驗數(shù)據(jù)失真，影響結果。本文將系統(tǒng)梳理細胞培養(yǎng)中常見的污染類型，并提供具體、可操作的全方位對策，解決這個難題。
常見的細胞污染分為以下幾種類型：
01 細菌污染
識別特征：
培養(yǎng)液變化：短期內（24-48小時內）變得渾濁，靜置后可見底部有沉淀（細菌團）。
pH值變化：培養(yǎng)液顏色迅速變黃（產(chǎn)酸），即便頻繁換液也無法維持。
顯微鏡下：在高倍鏡下可見大量細小的、顆粒狀的物質在做“布朗運動”，細胞生長停滯，形態(tài)變差，最終大量死亡。
圖 細胞細菌污染圖
對策：
將污染培養(yǎng)物高壓滅菌后丟棄，避免交叉污染。用75%乙醇徹底擦拭培養(yǎng)箱和超凈工作臺。
預防：
嚴格執(zhí)行無菌操作規(guī)范，穿戴實驗服、手套、口罩；對所有入孵育箱的試劑進行無菌測試；槍頭、培養(yǎng)瓶等耗材確保無菌，開封前用酒精或紫外消毒外包裝。
02 真菌污染
識別特征：
肉眼可見：培養(yǎng)液中出現(xiàn)白色或淺黃色的絮狀、球狀漂浮物。
顯微鏡下：霉菌菌絲呈細絲狀結構，類似樹枝；酵母菌呈卵圓形或球形，常出芽生殖。
圖 細胞真菌污染圖
對策：
同細菌污染，立即丟棄并徹底清潔環(huán)境。
預防：
真菌孢子無處不在且難以殺滅，需加強超凈臺的紫外線照射時間（至少30分鐘），并保持實驗室環(huán)境的干燥與整潔。
03 支原體污染
識別特征：
培養(yǎng)液不渾濁，細胞病變不明顯，但細胞狀態(tài)變差：生長緩慢、貼壁性下降、易凋亡。必須通過特定方法檢測，如DNA熒光染色或專門的支原體檢測試劑盒。
圖 細胞支原體污染圖
對策：
立即隔離疑似污染的細胞，并對所有細胞系進行常規(guī)支原體檢測；使用專業(yè)的支原體清除試劑，按說明書治療一段時間后，再次檢測確認是否轉陰。
預防：
對新引進的細胞系進行強制性的支原體檢疫；使用支原體預防劑；嚴禁共用培養(yǎng)基、胰酶等試劑，嚴禁用同一瓶試劑處理多株細胞。
04 黑膠蟲污染
識別特征：
培養(yǎng)液始終清亮、不渾濁、不變色；細胞間隙或表面出現(xiàn)“小黑點”“小碎片”，密度隨傳代遞增；黑點呈原地布朗運動，不定向游動；營養(yǎng)消耗快, 需頻繁換液；空泡化、拉絲、脫落；青霉素-鏈霉素、慶大、兩性霉素B均不能清除。
圖 細胞黑膠蟲污染圖
對策：
對于非珍貴細胞，最安全的方法是直接丟棄污染細胞，徹底消毒，從根本上杜絕擴散；對于珍貴細胞，可聯(lián)用多種抗生素嘗試抑制，或者直接購買市面上的支原體清除試劑，挽救細胞。
預防：
規(guī)范無菌操作、使用質量可靠的血清（可熱滅活）、定期清潔消毒培養(yǎng)箱和水浴鍋；務必定期凍存純凈的細胞種子，遭遇污染后及時復蘇；使用支原體預防試劑進行預防。
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