慢病毒包裝是指在體外生產(chǎn)出有感染能力但無復制能力的慢病毒顆粒的過程。最終得到的病毒顆?？梢愿腥灸繕思毎⒛康幕蛘系郊毎幕蚪M中，實現(xiàn)長期、穩(wěn)定的表達。但慢病毒包裝實驗常常出現(xiàn)許多問題影響最終效果，今天我們就來看看如何解決這些問題。
01 感染效率不足
熒光標記<30%，qPCR檢測載體拷貝數(shù)低。
原因和解決方法：
a.MOI設置不當：
根據(jù)文獻或說明書提供的參考 MOI，可在其上下各設2個2倍梯度驗證即可。
b.細胞不適合用慢病毒進行感染：
慢病毒適用于大部分細胞系，例如肝細胞、心肌細胞、腫瘤細胞等，但也有一些細胞不適合用慢病毒感染，可能更適合用腺病毒，可查閱文獻確定。
c.細胞本身較難感染：
懸浮細胞可使用平角離心轉(zhuǎn)染法，其他一些較難感染的細胞可進行二次感染法感染。
02 細胞死亡明顯
感染24 h內(nèi)出現(xiàn)大量漂浮細胞，細胞死亡明顯。
原因和解決方法：
a.MOI（感染復數(shù)）過高:
需要摸索尋找最適合的MOI，降低MOI值。
b.病毒上清本身毒性較大：
縮短轉(zhuǎn)染時間至，隨后換液。
c. 細胞本身較為敏感：
更換其它細胞進行嘗試。
03 病毒滴度低
qPCR或ELISA測得的病毒滴度顯著低于預期。
原因和解決方法：
a.轉(zhuǎn)染效率低：
檢查293T/293FT細胞代數(shù)（<P20）與融合度（70-80%）。
換用PEI、Lipofectamine 3000等轉(zhuǎn)染效果較好的轉(zhuǎn)染試劑；優(yōu)化DNA和轉(zhuǎn)染試劑比例。
b.質(zhì)粒質(zhì)量差：
A260/A280 < 1.8或鹽離子過高會抑制慢病毒包裝，可重新中提或大提質(zhì)粒。
c.包裝質(zhì)粒比例失衡:
優(yōu)化不同質(zhì)粒包裝系統(tǒng)的質(zhì)粒比例，可參考需要根據(jù)具體使用的質(zhì)粒組合和實驗條件進行優(yōu)化?？梢詮奈墨I或產(chǎn)品推薦的比例范圍進行摸索。
04 病毒滴度不穩(wěn)定
同批病毒凍存一段時間后滴度下降。
原因和解決方法：
a. 反復凍融：
首次收獲后即用0.22μm濾器分裝為50-100μL小管，一次性使用。
b. 操作條件不一致：
盡量選取狀態(tài)相同的細胞進行操作，實驗條件每次嚴格一致。
產(chǎn)品推薦
| 中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品貨號 |
| 慢病毒包裝試劑盒 | Lentiviral Packaging Kit | C230129 |