Rhod-2AM 是一種常應(yīng)用于細(xì)胞鈣離子檢測的熒光探針，尤其在 線粒體鈣信號（Mitochondrial Ca²? Signaling） 研究中具有獨特優(yōu)勢，在細(xì)胞生物學(xué)研究中發(fā)揮著重要作用。
1.為什么選擇 Rhod-2AM 研究線粒體鈣？
高靈敏度：對低濃度 Ca²?（~nM-μM 范圍）響應(yīng)靈敏。
線粒體靶向性：優(yōu)于其他鈣探針（如 Fluo-4、Fura-2），減少胞質(zhì)信號干擾。
雙模式檢測：適用于熒光顯微鏡（實時成像）和流式細(xì)胞術(shù)（群體分析）。
多通道兼容性：可與綠色熒光探針（如Fluo-4 AM）或藍(lán)色核染料（如Hoechst）聯(lián)用，實現(xiàn)多參數(shù)分析。
2.應(yīng)用場景示例
線粒體鈣與細(xì)胞凋亡：檢測凋亡刺激（如 STS）下線粒體鈣超載與 mPTP 開放的關(guān)系。
能量代謝研究：結(jié)合 Seahorse 分析儀，關(guān)聯(lián)鈣信號與 OXPHOS 效率。
神經(jīng)元活動：研究突觸后線粒體鈣瞬變（如與電生理聯(lián)用）。
3.使用技巧與注意事項
3.1優(yōu)化染色條件
A.細(xì)胞密度：建議1X105 cells/mL，避免過度擁擠影響染料加載。
B.孵育時間：30-45分鐘（37℃），過長可能導(dǎo)致染料外排或細(xì)胞毒性。
3.2干擾因素控制
A. 避免使用含血清培養(yǎng)基（酯酶活性干擾），加載后徹底清洗減少背景信號。
B. 線粒體膜電位崩潰劑（如CCCP）可驗證染料定位特異性。
3.3數(shù)據(jù)分析：
使用比率法（如與TMRM聯(lián)用）校正膜電位變化對熒光強(qiáng)度的影響。
圖示
圖2.利用激光掃描共聚焦顯微鏡分析了細(xì)胞內(nèi)游離 Ca2+ 的分布情況。
細(xì)胞內(nèi)游離 Ca2+ 通過紅色熒光探針Rhod-2 AM進(jìn)行檢測。細(xì)胞核用 DAPI（藍(lán)色）染色。攜帶 eGFP 報告基因的 pEZ-LV203 載體產(chǎn)生了綠色熒光蛋白。