Western blot是一種常用的實驗技術,用于檢測和分析蛋白質的存在和表達水平。Western blot包括蛋白質提取、電泳分離、轉膜、免疫染色等步驟。下面是一些常用的Western blot相關緩沖液(Buffer)配方。
1.RIPA緩沖液:
RIPA緩沖液是一種用于蛋白質提取的常用緩沖液,可以有效地裂解細胞膜并釋放蛋白質。以下是一種常用的RIPA緩沖液配方:
-氯化鈉(NaCl):150mM
- 三羥甲基氧甲烷(Tris) pH 7.4: 50 mM
-適量氫氧化鈉(NaOH)調整pH值
- 二硫化苯甲醇(β-mercaptoethanol) 或 DTT:1%
- 甘油(glycerol):1%
-磷酸鹽緩沖液:10mM
-磷酸二氫鉀(KH2PO4):1.5mM
-多普酰轉酶抑制劑(PMSF):1mM
-乙二胺四乙酸二鈉鹽(EDTA):1mM
-硫酸鎂(MgSO4):1mM
2.SDS-凝膠電泳緩沖液:
SDS-凝膠電泳是Western blot的重要步驟之一,SDS-凝膠電泳緩沖液配方:
- Tris酸:25 mM
- 甘氨酸(Glycine):250 mM
-SDS:0.1%
-水:適量
3.轉膜緩沖液:
轉膜緩沖液用于將電泳分離得到的蛋白質轉移到膜上進行進一步的分析。配方如下:
-二甲基亞砜(DMSO):20%
-甘氨酸:192mM
-氯酸鈉(NaClO3):20mM
- Tris酸:25 mM
-水:適量
4.阻斷緩沖液:
阻斷緩沖液用于在免疫染色之前預防非特異性結合,配方如下:
-牛血清蛋白(BSA):3-5%
-牛血清白蛋白(BSA):0.1-0.3%
-磷酸鹽緩沖液:10mM
- Triton X-100或Tween-20:0.1-0.5%
-NaN3:0.01-0.02%
5.抗體染色緩沖液如下配制:
-磷酸鹽緩沖液:10mM
-硼酸:1mM
-EDTA:5mM
- Tween-20:0.1-0.2%
-低脂牛奶粉(非脂奶粉):5-10%
-NaN3:0.02%
備注:以上都是常規基本配方,可能需要根據實驗的具體要求進行調整。不同實驗室和研究人員可能會根據實際需要進行配方上的調整。
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