預準備
預冷離心機、PBS、裂解液（RIPA 或 NP-40 等）
裂解液臨用前加蛋白酶/磷酸酶抑制劑（PMSF 1 mM或Na?VO? 1 mM或leupeptin 1 µg/mL 等）
收集細胞
貼壁：棄培養(yǎng)基 → 預冷 PBS 洗 2 次 → 用細胞刮（45° 角，輕柔）刮下細胞 → 吸入 1.5 mL EP 管
重懸：直接 600 ×g 4 °C 離心 5 min 收細胞 → PBS 洗 2 次
裂解
加裂解液比例參考：
6 孔板 1 孔 ≈ 100–150 µL
60 mm 皿 ≈ 100 µL
10 cm 皿 ≈ 300–400 µL
1×10? 細胞 ≈ 100 µL重懸細胞
冰上靜置 5 min（組織 3×30 s 間隔研磨）→ 如需要可短時超聲 3×5 s（冰浴間隔）
徹底裂解后 4 °C 12000–14000 ×g 離心 15–20 min，去碎片
取上清
先讓離心機完全停轉(zhuǎn)再開蓋
傾斜 45°，槍頭貼壁從液面下 2–3 mm 緩慢吸取，避免吸到沉淀；如仍渾濁可二次離心
常見注意事項
全程冰上操作，抑制蛋白酶活性
裂解液用量寧可略少，以提高蛋白濃度；難溶蛋白可延長裂解時間或改用含 SDS 的強裂解液
離心機必須配平，轉(zhuǎn)速/時間不足會導致上清中殘留碎片，堵塞凝膠孔洞
若下游做 Co-IP，盡量用非離子型去垢劑（NP-40、Triton X-100），避免 SDS 破壞蛋白復合物
推薦產(chǎn)品：
RIPA 細胞裂解液（貨號：SD0072）
適用于組織，細胞，細菌等裂解，裂解后可保留蛋白互作用。
NP-40 細胞裂解液（貨號：SD0071）
裂解后可保留蛋白互作，適用于CoIP、Pull-down、MST等實驗，裂解液臨用前加蛋白酶/磷酸酶抑制劑（PMSF 1 mM或Na?VO? 1 mM或leupeptin 1 µg/mL 等，能夠破壞細胞膜而不影響蛋白質(zhì)和RNA的結(jié)合。
紅細胞裂解液（貨號：SD0063）
1.紅細胞裂解液是利用細胞內(nèi)外存在鹽離子濃度差而導致細胞膜脹破的原理來裂解無核紅細胞的。
2.主要用于經(jīng)酶消化分散的組織細胞的分離純化，淋巴細胞的分離純化以及組織細胞蛋白與核酸提取等實驗中紅細胞的去除。
RIPA 細胞裂解液（貨號：SD0072）
推薦產(chǎn)品