問：LUC標記細胞小動物成瘤后檢測底物需要注射到腫瘤部位嗎?
答：在活體生物發光成像（BLI）中，D-熒光素（luciferin）經腹腔（IP）或皮下（SC）注射后即可通過血液循環到達全身各處，與已表達熒光素酶的腫瘤細胞反應，因此無需直接注射到腫瘤局部即可實現成像。
問：小動物成瘤后檢測不到 LUC 熒光怎么辦？
答：常見原因可按“表達-遞送-反應-采集”四步排查,具體如下， 收藏起來，LUC標記的小動物實驗輕松過關！
(一）表達環節
1. 熒光素酶（Luc）表達丟失：體外篩到的“陽性”克隆在體內傳代或凍存后發生啟動子甲基化、質粒丟失，導致實際表達量低于儀器檢測限。
2. 免疫清除：在免疫健全小鼠中，Luc 作為外源蛋白可被CD8? T細胞識別并殺傷高表達細胞，造成信號進行性下降甚至消失。
3. 啟動子沉默：CMV 等病毒啟動子易受 IFN-γ 等細胞因子影響而下調，尤其在炎癥或壞死區域。
（二）底物遞送環節駕駛安全
1. 底物量不足：腹腔注射劑量一般按150mg/kg計算，若稱重或稀釋有誤，或動物麻醉過深導致循環衰竭，底物難以到達腫瘤。
2. 給藥途徑不當：皮下/尾靜脈注射時漏液，或腫瘤血供差（中心大面積壞死），局部底物濃度低于Km值。
3. 底物失效：D-熒光素反復凍融、室溫放置 >2h會降解；粉末受潮也會失活。
(三）反應環境環節
1. 缺氧：腫瘤>8 mm時中心常嚴重缺血缺氧，熒光素酶反應需O?和ATP，缺氧區信號會顯著減弱。
2. pH 過低：壞死核心區pH<6.5會抑制酶活。
3. 底物競爭/抑制：血中高濃度脂肪酸、抗生素（如四環素）或動物同時給予其他熒光試劑，可產生抑制或吸收。
(四）信號采集環節
1. 儀器參數設置：曝光時間過短（<1 s）、binning值過低、光圈未全開都會漏掉弱信號；背景扣除閾值設得過高也會把真實信號“歸零”。
2. 毛發/位置干擾：黑毛或金屬耳標對560nm光子吸收強；深部臟器（胰腺、顱內）未用37 °C預熱臺，也造成信號衰減。
3. 采集窗口錯過：峰值一般在底物注射后10–15 min（小鼠），若延遲到 30min以后，信號已下降80%以上。
LUC檢測不到怎么辦？
① 體外再測一次細胞Luc活性（加底物立即發光可排除表達問題）；
② 同批底物在已知陽性瘤小鼠上測試，可排除底物/儀器因素；
③ 取瘤體做IHC或Western確認Luc蛋白是否仍在；
④ 若懷疑免疫清除，可改用Nude/NSG小鼠或短暫免疫抑制（環孢素3d）再挑戰。
LUC檢測不到怎么辦？
LC檢測不到怎么辦？
LUC檢測不到怎么辦