肝內膽管癌（ICC）是一種起源于肝內膽管的惡性腫瘤，早期癥狀隱匿、預后極差。ICC早期診斷缺失，缺乏敏感血清標志物。腫瘤相關抗原（TAAs）和腫瘤相關自身抗體（TAAbs）有助于腫瘤的診斷和治療。近期，復旦大學附屬中山醫院劉厚寶教授團隊聯合上海中醫藥大學中藥研究所張繼偉研究員在《J Exp Clin Cancer Res》 (IF:12.8) 上發表了題為“The DCDC2/ENO1 axis promotes tumor progression and immune evasion in intrahepatic cholangiocarcinoma via activating FGL1-LAG3 checkpoint”的論文。該研究首先利用20K人類蛋白質組芯片進行了自身抗體篩選，發現了血清中抗DCDC2自身抗體可作為早期診斷ICC的生物標志物。該研究揭示了DCDC2是ICC的新型腫瘤相關抗原，其通過穩定ENO1蛋白，從而激活AKT通路促進腫瘤進展，同時誘導ENO1依賴性FGL1轉錄上調，通過FGL1-LAG3檢查點抑制CD8+T細胞功能。靶向該軸為ICC診斷和治療提供了新策略。（華盈生物為該研究提供了20K人類蛋白質組芯片篩選自身抗體的檢測服務）
| 主要發現
1.發現DCDC2是ICC新型腫瘤相關抗原
研究者首先通過20K人類蛋白質組芯片（華盈生物提供此檢測服務）篩選患者血清中的腫瘤相關自身抗體（TAAbs），結果發現了DCDC2自身抗體在肝內膽管癌（ICC）中高表達且與預后不良相關。20K人類蛋白質組芯片篩選出了31種腫瘤相關自身抗體（TAAb），并分析其對應基因在腫瘤組織中的表達水平，發現了DCDC2表達水平在CCA（尤其是ICC）中特異性顯著上調。通過多個獨立隊列（FUDAN和TCGA-CHOL）驗證了DCDC2的mRNA和蛋白在ICC組織中的高表達及膜分布異常，并證實ICC患者血清中DCDC2自身抗體水平顯著升高，免疫組化進一步顯示DCDC2高表達與ICC患者不良預后相關。這些發現表明，DCDC2自身抗體和DCDC2蛋白表達有望作為ICC早期診斷和預后的生物標志物。
2.DCDC2通過激活AKT信號通路促進ICC細胞增殖和轉移
研究者通過慢病毒系統在ICC細胞系（HCCC-9810和HuCC-T1）中過表達DCDC2，并進行了體外細胞增殖CCK-8實驗、克隆形成能力集落形成實驗以及遷移和侵襲Transwell實驗，實驗結果顯示過表達DCDC2顯著增強了ICC細胞的增殖，克隆形成，遷移，侵襲能力。體內實驗進一步證實，DCDC2過表達增強腫瘤生長（異種移植模型）和肝轉移（脾臟注射模型）。機制上，RNA-seq和GSEA分析顯示DCDC2高表達激活PI3K-AKT信號通路，并通過Western blot驗證了AKT磷酸化水平升高。使用AKT抑制劑處理后，DCDC2的促癌效應被逆轉，表明DCDC2通過PI3K-AKT通路驅動ICC進展。這些結果揭示了DCDC2作為ICC促癌因子的功能及其依賴AKT激活的作用機制。
3. DCDC2通過上調FGL1表達促進ICC免疫逃逸
為進一步探討DCDC2對ICC免疫微環境的影響。研究者通過分析RNA-seq和TCGA-CHOL數據集，發現DCDC2高表達與免疫相關通路如TCR-PLCG-ITPR、CD80/CD86-CTLA4-PP2A等富集相關，推測DCDC2可能通過免疫調節促進ICC進展。人源化小鼠異種移植和同源模型的單細胞測序結果顯示DCDC2并沒有影響免疫細胞比例。分析免疫檢查點配體的表達，發現了LAG3的配體FGL1顯著上調，且在臨床樣本中DCDC2與FGL1表達呈正相關。進一步研究發現過表達DCDC2顯著降低CD8+T細胞中細胞毒性細胞因子Granzyme B以及IFN-γ的表達。這些結果表明DCDC2通過激活FGL1-LAG-3軸抑制CD8+T細胞功能，從而驅動ICC的免疫逃逸。研究者進一步研究靶向LAG-3可以抑制DCDC2的促腫瘤作用。
4.發現DCDC2相互作用蛋白ENO1
研究者通過Co-IP聯合質譜分析發現DCDC2與ENO1相互作用，并通過其DCX結構域與ENO1的TIM barrel結構域結合。進一步實驗表明，DCDC2通過抑制FBXW7介導的ENO1泛素化降解來穩定ENO1蛋白水平，從而延長其半衰期。功能上，ENO1被證實是DCDC2下游的關鍵效應分子，其敲除可逆轉DCDC2對AKT磷酸化的激活，并抑制DCDC2驅動的ICC細胞增殖、遷移和侵襲。DCDC2通過穩定ENO1，促進ENO1的核內表達增加，進一步促進ENO1結合FGL1啟動子，從而上調FGL1基因表達。這些結果表明DCDC2通過通過穩定ENO1激活AKT信號通路，并上調FGL1表達，從而發揮促ICC生長、轉移及免疫逃逸的作用。
| 總結與討論
本研究利用20K人類蛋白質組芯片技術，成功鑒定出DCDC2作為肝內膽管癌（ICC）的新型腫瘤相關抗原（TAA），并揭示了其在腫瘤進展和免疫逃逸中的關鍵作用。通過抗體芯片的廣譜篩選，研究發現ICC患者血清中抗DCDC2自身抗體水平顯著升高，表明其作為潛在診斷標志物的價值。此外，研究深入解析了DCDC2通過穩定ENO1蛋白激活AKT信號通路，進而上調FGL1表達，最終通過FGL1-LAG3軸抑制CD8+T細胞功能的分子機制。
| 相關文獻
Wan W, Li Y, Sun W, Cheng Z, Ma F, Shen S, Liu H, Zhang J.The DCDC2/ENO1 axis promotes tumor progression and immune evasion in intrahepatic cholangiocarcinoma via activating FGL1-LAG3 checkpoint. J Exp Clin Cancer Res.2025;44(1)