博格隆的多模式層析填料兼具離子交換作用、疏水作用和氫鍵作用機(jī)制，表現(xiàn)出優(yōu)秀的分辨率，又因其獨(dú)特機(jī)制能夠耐受較高電導(dǎo)的樣品上樣，常用于酵母或動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)上清中的重組膠原蛋白純化，以及大腸桿菌破碎液中膠原蛋白的高效分離。本文聚焦博格隆多模式層析介質(zhì)在重組膠原蛋白純化中的應(yīng)用。
膠原蛋白層析介質(zhì)選擇策略
Fig.1 膠原蛋白層析介質(zhì)選擇策略
多模式介質(zhì)MMC系列產(chǎn)品介紹
博格隆MMC系列產(chǎn)品包括Diamond MMC和Diamond MMC Mustang，下表列出了兩款填料的技術(shù)參數(shù)：
Table 1. Diamond MMC和Diamond MMC Mustang技術(shù)參數(shù)
對(duì)比兩款MMC產(chǎn)品參數(shù)，Diamond MMC粒徑大、離子載量高，適用于澄清料液中膠原蛋白的純化；Diamond MMC Mustang粒徑小，具有更高的分辨率，可用于需去除膠原蛋白降解片段的粗純或精純步驟。兩款填料均具備耐高鹽上樣的特點(diǎn)。
應(yīng)用案例
• 案例1: Diamond MMC純化酵母表達(dá)III型膠原蛋白
樣品：電導(dǎo)35.16mS/cm，pH3.0
Fig.2 Diamond MMC層析純化圖譜
在此案例中，目標(biāo)分子有較嚴(yán)重的降解，經(jīng)過優(yōu)化洗雜和洗脫電導(dǎo)和pH條件，最終去除降解片段和雜質(zhì)蛋白，獲得純度94.95%重組膠原蛋白組分。
• 案例2: Diamond MMC Mustang純化酵母表達(dá)XVII型膠原蛋白
樣品：用水稀釋2倍，調(diào)節(jié)電導(dǎo)為21.23mS/cm，pH4.0
Fig.3 Diamond MMC Mustang層析純化圖譜
在本案例中，上樣電導(dǎo)高達(dá)21.23mS/cm，無目標(biāo)蛋白流穿；經(jīng)兩步洗雜效果明顯，最終通過鹽線性梯度洗脫，獲得高純度重組膠原蛋白。
總結(jié)
多模式層析介質(zhì)憑借其多種作用機(jī)制，具有耐高鹽上樣和高分辨等特點(diǎn)，適用于重組膠原蛋白的一步層析工藝設(shè)計(jì)，或兩步層析中的精純實(shí)現(xiàn)高純度膠原蛋白生產(chǎn)。隨著重組膠原蛋白產(chǎn)業(yè)發(fā)展，博格隆多模式層析介質(zhì)以其高效、靈活的特點(diǎn)，將在其中扮演重要角色。
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