基因型鑒定是很多分子生物學(xué)研究的必經(jīng)步驟。然而,傳統(tǒng)的基因鑒定流程十分繁瑣:從小鼠解剖、組織分離,到DNA提取、純化,再到PCR擴增和電泳分析——整個過程耗時耗力,甚至需要一整天才能完成。其中,核酸提取步驟還可能因操作不當(dāng)導(dǎo)致樣本損失或污染。
由此,直接PCR(Direct PCR)技術(shù)應(yīng)運而生。它無需DNA提取純化,可直接利用原始樣本(如動物組織、血液、植物葉片等)進行PCR擴增,最大限度簡化實驗流程,讓基因檢測更快速、更簡單、更輕松!
什么是直接PCR?
直接PCR是一種特殊的PCR技術(shù),其核心在于采用高耐受性的聚合酶,能夠抵抗樣本中的抑制物(如蛋白質(zhì)、多糖等),即使面對未經(jīng)純化的粗樣本,也能高效擴增目標(biāo)基因。
直接PCR摒棄了傳統(tǒng)PCR耗時的提取流程,縮短實驗時間,并降低了在提取過程中可能引入的污染風(fēng)險。
圖1. 直擴PCR與傳統(tǒng)PCR技術(shù)比對圖
Arcegen直接PCR試劑盒——讓實驗更輕松
針對不同樣本類型(動物組織、植物、血液等)優(yōu)化,穩(wěn)定、高效擴增:
♦ 無需核酸純化,直接使用原始樣本或簡單裂解產(chǎn)物作為模板。
♦ 高靈敏度,即使微量樣本也能獲得清晰擴增條帶。
♦ 廣泛兼容,適用于小鼠基因型鑒定、轉(zhuǎn)基因檢測、病原體篩查等。
♦ 降低成本,減少提取試劑和耗材的使用,尤其適合高通量篩選。
圖2. 直擴PCR擴增流程圖
產(chǎn)品使用效果
血液直擴PCR(N132022)
適用樣本:含EDTA、肝素、檸檬酸鹽等常規(guī)抗凝劑的新鮮血液、冷藏(凍)血液及其他常見血液樣本。
產(chǎn)品優(yōu)勢:擴增速度快,僅需3-10 sec/kb;不同濃度血液模板耐受性強。
8kb片段擴增速度可達10 sec/kb
圖3. 使用N132022直接從人全血中擴增不同長度DNA片段。
血樣為-20℃儲存的EDTA抗凝血,血液模板濃度為10%,
延伸時間設(shè)置10 sec/kb。M為電泳marker。
不同濃度血液模板耐受性強
圖4 A. 使用N132022直接從人EDTA抗凝全血中擴增2 kb長度、GC含量71%的DNA片段。血液模板濃度設(shè)置梯度0.5-50%,延伸時間為10 sec/kb。B. 使用N132022直接從小鼠EDTA抗凝全血中擴增2.2 kb長度、GC含量67%的DNA片段。血液模板濃度設(shè)置0.5-50%,延伸時間為10 sec/kb。M為marker。
小鼠組織直擴PCR(N132021)
適用樣本:小鼠組織(如鼠尾、鼠耳、鼠趾等)。
產(chǎn)品優(yōu)勢:對樣本投入量要求低,僅需5 mg小鼠組織或1-5 mm鼠尾。
模板兼容性廣泛
圖5. 使用N132021直接裂解(70℃裂解10 min)
擴增人293細胞、唾液、頭皮組織,均有明顯的目的條帶。
與競品相比,擴增速度快,產(chǎn)量高
1. 質(zhì)粒 N132021 1 kb;2. T品牌 鼠耳 1 kb;3. T品牌鼠尾 1 kb;4. T品牌鼠趾 1 kb;5-6. N132021 鼠耳 1 kb;7-8. N132021 鼠尾 1 kb;9-10. N132021 鼠趾 1 kb;11. 質(zhì)粒 N132021 2 kb;12. T品牌鼠尾 2 kb;13. T品牌鼠耳 2 kb;14. T品牌鼠趾 2 kb;15-16. N132021 鼠耳 2 kb;17-18. N132021 鼠尾 2 kb;19-20. N132021 鼠趾 2 kb
圖6. 使用N132021和T品牌產(chǎn)品裂解不同組織擴增不同大小的目的片段,N132021延伸速率為5 sec/kb,T品牌延伸速率60 sec/kb。(70℃裂解10 min)
植物直擴PCR(N132023)
適用樣本:水稻、大豆、玉米、擬南芥等植物的葉片、種子。
產(chǎn)品優(yōu)勢:裂解樣本快,不同類型樣本均能高效擴增。
不同類型植物葉片擴增效率高
圖7. 使用N132023擴增不同類型植物葉片結(jié)果。
M:100 bp DNA ladder。C:相應(yīng)植物純化基因組DNA為模板。1-2:葉片組織裂解產(chǎn)物為模板。循環(huán)數(shù):30個循環(huán)。
直接PCR技術(shù)的出現(xiàn),讓基因檢測告別了冗長的DNA提取步驟,實驗流程更簡單、更快速。無論是科研還是臨床檢測,它都能幫助研究者節(jié)省時間、減少誤差、提高效率。
如果你還在為繁瑣的核酸提取而煩惱,不妨試試直接PCR試劑盒,讓實驗變得更輕松!
產(chǎn)品推薦
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品貨號 |
血液直擴PCR試劑盒(含染料) | Blood Advanced Direct PCR Kit (With Dye) | N132022 |
小鼠組織直擴PCR試劑盒(含染料) | Mouse Tissue Direct PCR Kit (With Dye) | N132021 |
植物直擴PCR試劑盒(含染料) | Plant Tissue Direct PCR Kit (With Dye) | N132023 |