各位科研打工人，你是不是也遇到過(guò)原代細(xì)胞轉(zhuǎn)染不進(jìn)去的問(wèn)題？要么轉(zhuǎn)染不進(jìn)去，要么加大劑量后，轉(zhuǎn)是轉(zhuǎn)進(jìn)去了，但細(xì)胞死了一大片。那么今天，我們就來(lái)聊聊實(shí)驗(yàn)室里最讓人頭痛的話題——原代細(xì)胞轉(zhuǎn)染。
原代細(xì)胞，是指直接從生物體組織分離培養(yǎng)的細(xì)胞，它們保持著最接近體內(nèi)狀態(tài)的特性，是許多研究的"黃金標(biāo)準(zhǔn)"。但正是這種"原生態(tài)"的特性，讓它們變得格外難伺候：
1.體質(zhì)敏感：離開(kāi)舒適的體內(nèi)環(huán)境后，對(duì)外源核酸更為敏感，會(huì)啟動(dòng)更強(qiáng)的防御機(jī)制降解外源DNA/RNA。
2. 環(huán)境適應(yīng)性差：對(duì)轉(zhuǎn)染試劑和外來(lái)培養(yǎng)基等物質(zhì)不夠適應(yīng)，需要特定的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件，通用型轉(zhuǎn)染方案往往水土不服。
3. 增殖有限：增殖能力有限，轉(zhuǎn)染窗口期轉(zhuǎn)瞬即逝。
4. 耐受性差：對(duì)于一般細(xì)胞能夠耐受的轉(zhuǎn)染試劑毒性，原代細(xì)胞很可能耐受不了。
5. 實(shí)驗(yàn)重復(fù)性差：即便同批次分離的細(xì)胞，轉(zhuǎn)染效率也可能天差地別，實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)性成謎。
那么，該如何化解這些難題呢？針對(duì)原代細(xì)胞的以上特點(diǎn)，我們可以嘗試如下解決方案：
一 試劑選擇有講究：
脂質(zhì)體類試劑通常比陽(yáng)離子聚合物更溫和，更有利于原代細(xì)胞的存活和核酸的進(jìn)入；或者優(yōu)先選用專為原代細(xì)胞設(shè)計(jì)的轉(zhuǎn)染試劑。
二 把控時(shí)機(jī)很關(guān)鍵：
在原代細(xì)胞對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期進(jìn)行轉(zhuǎn)染，此時(shí)細(xì)胞生長(zhǎng)力旺盛，耐受力較強(qiáng)；細(xì)胞密度要恰到好處(通常70-80%)，太少，不利于細(xì)胞存活，太多，不利于轉(zhuǎn)染成功；避免傳代次數(shù)過(guò)多（傳代次數(shù)過(guò)多會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞狀態(tài)變差增殖減弱，更不利于轉(zhuǎn)染）。
三 優(yōu)化方案不可少：
必須做劑量梯度預(yù)實(shí)驗(yàn)，每種原代細(xì)胞對(duì)于核酸和轉(zhuǎn)染試劑的耐受度、接受度都不一樣，不做預(yù)實(shí)驗(yàn)沒(méi)法確定最優(yōu)轉(zhuǎn)染條件；質(zhì)粒純度要保證，高純度質(zhì)粒有利于高效轉(zhuǎn)染，生產(chǎn)質(zhì)粒時(shí)可以考慮使用啟動(dòng)子增強(qiáng)表達(dá)。
四 輔助手段來(lái)幫忙：
對(duì)于耐受性差的原代細(xì)胞，可在轉(zhuǎn)染后立即更換為新鮮培養(yǎng)基，以延長(zhǎng)恢復(fù)時(shí)間；對(duì)于特別嬌貴的原代細(xì)胞，在轉(zhuǎn)染前可考慮使用特殊培養(yǎng)因子等，保證細(xì)胞狀態(tài)。
來(lái)自前線科研人的血淚建議
我們采訪了多位"轉(zhuǎn)染老手"，總結(jié)出這些肺腑之言：
"不要迷信文獻(xiàn)條件，一定要自己優(yōu)化！"
"記錄每一批細(xì)胞的詳細(xì)信息，找出規(guī)律。"
"準(zhǔn)備Plan B，有些細(xì)胞就是轉(zhuǎn)不進(jìn)去，換方法比死磕強(qiáng)！"
"保持耐心，原代細(xì)胞轉(zhuǎn)染本來(lái)就是一場(chǎng)持久戰(zhàn)。"
當(dāng)然，如果你希望更加高效、便捷地完成轉(zhuǎn)染，那也是有其他方法的。Arcegen Celthy SureXcel 3000轉(zhuǎn)染試劑——新一代高分子轉(zhuǎn)染試劑，從轉(zhuǎn)染每一步提高成功率！
高效轉(zhuǎn)染：在293T、HeLa、MCF7、HepG2、A549等三十多個(gè)細(xì)胞系中驗(yàn)證，具有強(qiáng)大的轉(zhuǎn)染效率；
廣泛兼容：DNAmRNA/siRNA/miRNA/ASO全類型核酸通用；
毒性極低：新型高分子材料，毒性極低，最大限度提高細(xì)胞存活率。
對(duì)于原代細(xì)胞轉(zhuǎn)染極其適配！
原代巨噬細(xì)胞BMDM質(zhì)粒轉(zhuǎn)染
使用Celthy SureXcel 3000和競(jìng)品T*3000同時(shí)在原代巨噬細(xì)胞BMDM中轉(zhuǎn)染質(zhì)粒DNA，結(jié)果顯示，Celthy SureXcel 3000轉(zhuǎn)染效率優(yōu)于競(jìng)品T*3000。
原代豬肺泡巨噬細(xì)胞質(zhì)粒轉(zhuǎn)染
使用Celthy SureXcel 3000和競(jìng)品T*3000同時(shí)在原代豬肺泡巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)染質(zhì)粒DNA，結(jié)果顯示，Celthy SureXcel 3000轉(zhuǎn)染效率優(yōu)于競(jìng)品T*3000。
原代真皮成纖維細(xì)胞質(zhì)粒轉(zhuǎn)染
使用Celthy SureXcel 3000和競(jìng)品B*8000同時(shí)在原代真皮成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)染質(zhì)粒DNA，結(jié)果顯示，Celthy SureXcel 3000轉(zhuǎn)染效率優(yōu)于競(jìng)品B*8000。
除了原代細(xì)胞，Arcegen SureXcel 3000在mRNA、siRNA轉(zhuǎn)染中也具有優(yōu)秀的轉(zhuǎn)染效果。
mRNA高效轉(zhuǎn)染
使用Celthy SureXcel 3000和競(jìng)品T*3000同時(shí)在多種細(xì)胞中轉(zhuǎn)染mRNA，結(jié)果顯示，在不同細(xì)胞中，Celthy SureXcel 3000表現(xiàn)均優(yōu)于競(jìng)品T*3000。
siRNA高效轉(zhuǎn)染
使用Celthy SureXcel 3000和競(jìng)品T*3000同時(shí)在多種細(xì)胞中轉(zhuǎn)染siRNA，結(jié)果顯示，在不同細(xì)胞中，Celthy SureXcel 3000表現(xiàn)均優(yōu)于競(jìng)品T*3000。
現(xiàn)在試用Celthy SureXcel 3000轉(zhuǎn)染試劑，體驗(yàn)立即提升的細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率！
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| 中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品貨號(hào) |
| Celthy SureXcel 3000轉(zhuǎn)染試劑 | Celthy SureXcel 3000 Transfection Reagent | C130010 |