細(xì)胞的EV主要是指：外泌體、微泡和凋亡小體；身體在各種體液中都含有大量 EV，包括血漿、尿液甚至牛奶。血漿衍生的 EV 具有抗炎、抗氧化和促血管生成（促進(jìn)血管生成）特性，目前正在被研究用于治療不同的條件，如心臟損傷、骨關(guān)節(jié)炎、傷口、衰老和肌肉損傷。富含血小板的血漿 (PRP) 成為另一種令人興奮的來源，為 EV 提供了再生潛力。 EVs可以促進(jìn)細(xì)胞增殖和血管形成，有助于受傷后的組織修復(fù)。
分離細(xì)胞外囊泡（EVs），尤其是外泌體，通常涉及一系列離心步驟，以去除細(xì)胞碎片和較大的細(xì)胞器，然后進(jìn)行超速離心以富集EVs。
分離步鄹開始啦！
1. 細(xì)胞培養(yǎng)和上清收集:
培養(yǎng)細(xì)胞，通常是貼壁細(xì)胞，并在合適的培養(yǎng)基中生長。
收集細(xì)胞培養(yǎng)上清，去除血清（通常使用無血清培養(yǎng)基或預(yù)先去除血清的培養(yǎng)基），以避免血清中的蛋白質(zhì)干擾。
收集上清后，進(jìn)行一系列低速離心步驟，去除細(xì)胞和較大的細(xì)胞碎片。
2. 低速離心:
首先，4°C，300×g，離心10分鐘，去除細(xì)胞和細(xì)胞碎片。
然后，4°C，2000×g，離心10分鐘，進(jìn)一步去除較大的細(xì)胞器。
最后，4°C，10000×g，離心30分鐘，去除更小的細(xì)胞碎片和凋亡小體。
3. 超速離心:
將經(jīng)過低速離心后的上清液轉(zhuǎn)移到超速離心管中。
使用超速離心機(jī)，在4°C，100,000×g或更高速度，離心70-120分鐘，以沉淀EVs。
小心地吸出上清液，保留沉淀物。
用PBS等緩沖液重懸沉淀物，再次進(jìn)行超速離心，以進(jìn)一步純化EVs。
最后，用PBS重懸EVs，并分裝冷凍保存。
4. 純化方法補(bǔ)充:
密度梯度離心:除了超速離心，還可以使用密度梯度離心方法，例如蔗糖密度梯度離心，來進(jìn)一步純化EVs，基于EVs的密度差異來分離。
免疫磁珠法:使用特異性抗體結(jié)合到EVs表面標(biāo)志物上的磁珠，然后通過磁力分離來富集EVs。
超濾:利用不同孔徑的超濾膜來分離不同大小的EVs。
5. 注意事項(xiàng):
整個(gè)分離過程應(yīng)在4°C下進(jìn)行，以減少EVs的降解。
使用無菌的離心管和試劑，避免污染。
在重懸沉淀物時(shí)，要輕輕吹打，避免破壞EVs。
分離的EVs應(yīng)立即冷凍保存，以保持其生物活性
推薦產(chǎn)品：
0.25%細(xì)胞胰酶消化液/EDTA,(貨號(hào)：SD0003)
胰酶消化液(含EDTA)由0.25%胰酶、0.02%EDTA等組成，經(jīng)過濾除菌。本試劑可以直接用于培養(yǎng)細(xì)胞的消化，或者一些組織的消化，通常室溫下2min左右就可以消化下大多數(shù)貼壁細(xì)胞。
組織/類器官消化酶,(貨號(hào)：SD0013)
使膠原蛋白和纖維粘連蛋白的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)解離，而不損壞細(xì)胞表面結(jié)構(gòu)的完整性。使用本產(chǎn)品進(jìn)行組織消化可以使組織中細(xì)胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動(dòng)，適用于各種正常和腫瘤組織類器官。
