小鼠聽覺系統與人類高度同源，而耳蝸基底膜上的毛細胞更是聽覺信號傳導的核心單元 —— 毛細胞一旦損傷便會引發不可逆聽力喪失，因此精準獲取完整、活性良好的耳蝸基底膜，是解析聽覺機制、探索耳聾病因、開發治療方案的首要前提。
但小鼠耳蝸僅綠豆大小，基底膜以毫米計，需全程顯微鏡下精細操作。靈賦拓普生物于本文整理了標準化 “七步取材法” 及實操技巧，幫你避開坑點、高效獲取高質量樣本。
1. 解剖取顳骨：奠定樣本基礎
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操作流程：小鼠安樂死后，將頭部用 75% 乙醇消毒；在顯微鏡下沿頭部正中從枕骨大孔處剪開顱骨，小心取出腦組織（避免牽拉損傷內耳），最后取下雙側含耳蝸、前庭及半規管的顳骨塊。
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實操提示：剪顱骨時力度需輕柔，避免剪刀尖端觸碰內耳組織，若腦組織粘連緊密，可先用生理鹽水輕微沖洗再分離。
2. 暴露耳蝸：精準去除冗余結構
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操作流程：取下含內耳組織的顳骨塊后，逐層去除表面的膜性組織及軟骨環樣結構，直至清晰暴露耳蝸、圓窗和前庭窗。
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關鍵注意：軟骨環韌性較強，不可直接撕扯，需沿邊緣緩慢剝離，防止連帶損傷耳蝸外壁。
3. 打開耳蝸：把控力度是核心
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操作流程：在顯微鏡下，用精細針頭在耳蝸頂端開一個小窗，再在底部開第二個小窗。力度需恰到好處 —— 過大易破壞內部結構，過小則無法形成后續操作通道。
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練習建議：新手可先在廢棄顳骨上練習針頭力度，熟悉 “剛穿透骨壁、不觸及內部” 的手感后再操作正式樣本。
4. 灌注固定：維持樣本生理狀態
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操作流程：通過開好的小窗緩慢灌注固定液，使耳蝸內結構保持其生理狀態。灌注的速度和壓力都有講究，需避免因操作不當破壞細胞形態。
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核心原則：灌注需勻速緩慢，防止壓力驟增沖散毛細胞或基底膜，確保固定液充分覆蓋所有區域。
5. 脫鈣軟化：取出完整基底膜的關鍵
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操作流程：將固定后的耳蝸放入脫鈣液中浸泡，軟化骨頭。這一步是后續順利剝離基底膜的關鍵 —— 脫鈣不足會導致骨頭過硬、無法分離，脫鈣過度則可能破壞細胞結構。
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判斷標準：可通過鑷子輕捏骨壁判斷軟化程度，以 “骨壁能輕微變形但不碎裂” 為宜。
6. 剝離軟組織：暴露螺旋狀基底膜
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操作流程：待耳蝸軟化后，輕輕剝離內部的前庭膜和其他軟組織，此時螺旋形的基底膜會逐漸暴露。
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操作技巧：軟組織與基底膜可能存在粘連，可借助針尖輕輕挑起軟組織，避免直接拉扯導致基底膜斷裂。
7. 分離基底膜：最后一步定成敗
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操作流程：用精細鑷子和精細解剖刀，貼近骨螺旋板輕輕分離基底膜，全程需保持動作平緩，確保基底膜完整性。
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重點提醒：這是最關鍵的一步，若發現基底膜有撕裂風險，可暫停操作，調整鑷子角度后再繼續，切勿急躁。
成功獲取高質量基底膜，離不開以下四點核心積累： -
工具適配性：精細針頭、鑷子、解剖刀是必備工具，工具的精細度直接影響操作精度 —— 劣質工具易導致樣本劃傷或破損，需優先選擇適配微小結構操作的專用工具。
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及時固定：組織固定不及時會導致細胞自溶，此前所有操作都會前功盡棄。建議小鼠安樂死后，30 分鐘內啟動固定流程，最大限度保留樣本活性。
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穩定與耐心：操作時可將肘部支撐在實驗臺面上，減少手部抖動；遇到組織粘連、剝離困難時，切勿強行操作，可暫停 1-2 分鐘調整狀態，耐心是避免失誤的關鍵。
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反復練習：沒有人第一次就能做出完美的基底膜取材。建議先用廢棄樣本練習 3-5 次，熟悉各步驟手感后再操作正式樣本，通過反復實操積累經驗，逐步提升成功率。
合格的基底膜樣本，可支撐多類關鍵實驗，為聽覺研究提供有力支撐： -
免疫熒光染色：標記特定蛋白（如毛細胞特異性蛋白），觀察其在基底膜上的表達與定位；
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電生理記錄：通過膜片鉗等技術，研究毛細胞的機械電轉導特性，解析聽覺信號傳導機制；
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基因表達分析：提取基底膜組織 RNA，開展 qPCR、測序等實驗，探索聽覺相關基因網絡；
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藥物篩選：將基底膜暴露于潛在治療化合物中，檢測毛細胞存活率，評估藥物的聽力保護效果。
無論是剛接觸耳蝸取材的新手，還是需要優化流程的研究者，若在實操中遇到力度把控、脫鈣時間判斷等問題，都可交流探討。靈賦拓普生物也能提供從取材到后續實驗的技術支持，助力大家高效獲取合格樣本，少走彎路，推進聽覺領域研究更順利開展。
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