隨著分子診斷的不斷發(fā)展，引物探針全預(yù)混試劑以方便快捷的優(yōu)勢(shì)成為熱門需求。然而傳統(tǒng)Taq酶抗體原料通常僅封閉Taq酶的聚合活性，其5'-3'外切酶活性仍然暴露，導(dǎo)致與探針混合后，在低溫下仍發(fā)生探針切割釋放信號(hào)，造成假陽性的問題。
為了解決上述問題，近岸蛋白特別推出雙活性封閉的Taq酶抗體（目錄號(hào)：Z088），與Taq DNA Polymerase 結(jié)合后，能夠同時(shí)高效封閉其5'→3'聚合酶活性和5'→3'外切酶活性，從而抑制低溫條件下由引物的非特異性退火引起的非特異性擴(kuò)增，和探針切割造成的假陽性，從而支持引物探針、酶以及Buffer等全預(yù)混qPCR/qRT-PCR體系的搭建。
產(chǎn)品特點(diǎn)
1）高特異性：與Taq 酶親和力高，有效避免非特異性擴(kuò)增；
2）熱啟動(dòng)迅速：95 ℃、30 s 即可啟動(dòng)Taq 酶活性；
3）支持全預(yù)混：可將除模板以外的所有組分預(yù)混成一管，使用便捷高效；
4）適用范圍廣：適配野生型及多種突變型Taq酶的封閉。
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產(chǎn)品性能
1 雙活性封閉性能優(yōu)
將帶有熒光標(biāo)記的模板分別與未封閉、單封閉抗體以及雙封閉抗體的Taq酶混合，50℃實(shí)時(shí)檢測(cè)熒光值變化。結(jié)果顯示，雙封閉抗體能夠很好的封閉Taq酶的5' - 3'聚合酶活性以及5' - 3'外切酶活性。同時(shí)使用雙封閉抗體，品牌A和品牌B同類產(chǎn)品分別封閉Taq DNA聚合酶，檢測(cè)封閉效果。結(jié)果顯示，近岸蛋白產(chǎn)品的封閉效果優(yōu)于品牌A和品牌B。
圖示1. 不同活性位點(diǎn)封閉效果測(cè)試
圖示2. 封閉效果驗(yàn)證
2 酶活釋放快
使用5U/ul 雙抗體封閉Taq DNA聚合酶，95℃下熱啟動(dòng)30s。結(jié)果顯示酶活釋放速度快，95℃，30 s即可釋放酶活，不影響后續(xù)擴(kuò)增。
圖示3. 酶活釋放效果測(cè)試
3 適配全預(yù)混
使用單封閉抗體，雙封閉抗體分別封閉Taq DNA聚合酶，混合ASFV的引物探針制備成全預(yù)混試劑，在37℃放置7d后，分別擴(kuò)增2000拷貝，200拷貝和20拷貝ASFV質(zhì)粒。結(jié)果顯示，雙封閉抗體全預(yù)混的基線更平穩(wěn)，擴(kuò)增平臺(tái)值更優(yōu)，且37℃穩(wěn)定性強(qiáng)，與-20℃保存試劑擴(kuò)增無明顯差異。
圖示4. 不同抗體封閉的全預(yù)混效果測(cè)試
4 穩(wěn)定性強(qiáng)
使用熱加速破壞性試驗(yàn)測(cè)試雙封閉抗體的穩(wěn)定性。在37℃放置2d、5d、7d和14d，通過熒光法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)雙封閉抗體（Z088）在14d封閉效果表現(xiàn)優(yōu)異，穩(wěn)定性更高。
圖示5. 雙封閉抗體穩(wěn)定性測(cè)試
5 適用范圍廣
使用雙封閉抗體分別封閉野生型和突變型TaqDNA 聚合酶，通過熒光法檢測(cè)封閉效果。結(jié)果顯示，對(duì)于不同類型的Taq酶，近岸蛋白雙封閉抗體封閉效果表現(xiàn)優(yōu)異。
圖示6. 雙封閉抗體適配不同類型的Taq酶
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