購買細胞通常是培養基中常溫寄送過來的,接收后觀察細胞是否貼壁(需要看說明書,細胞是否是貼壁的或者懸浮的),狀態是否正常;如果是凍存干冰寄送,則需注意是否干冰已完全揮發,細胞是否被污染。
一:消化
1、顯微鏡觀察細胞是否已長到70%以上,提前在生物安全柜準備好離心管,移液槍,胰酶,PBS,按照說明書制備好的新培養基;
2、將瓶中的培養基吸出,暫放到離心管中。使用PBS潤洗底部2-3遍,然后倒掉PBS;
3、對于貼壁細胞,需要加入少量的胰酶進行消化,將瓶子放入培養箱1-2min,在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。

4、1000RPM 條件下離心4-5分鐘,倒掉上清;根據需要,進行下一步操作:
傳代:加入1ml新的培養基重懸細胞,然后分裝到不同細胞瓶,加入足量的培養基,備注好傳代信息,放到培養箱,按照說明書設置培養條件,每日觀察生長情況;
凍存:加入1ml凍存液重懸細胞,裝到凍存管中,管壁備注好細胞信息,放入-80冰箱過夜再放到液氮罐凍存;

注射:加入PBS重懸,洗2-3次,根據注射細胞量和濃度加PBS,放到碎冰上,1-2小時內給實驗動物注射。
二、復蘇
1、將細胞管從液氮或者-80冰箱取出,在37℃水浴鍋中迅速晃動1-2min解凍;
2、加入 4mL 培養基混合均勻,在 1000RPM 條件下離心4 分鐘,棄去上清液,補加 1-2mL 培養基后吹勻;
3、然后將所有細胞懸液加入放有足量培養基的培養瓶中培養過夜,第二天檢查細胞密度。
三、寄送
1、如細胞凍存在液氮或者-80冰箱,直接使用干冰寄送即可;
2、如果是復蘇培養好的細胞,直接培養基常溫寄送即可;
3、如果是需要進行注射,可以將細胞管放在碎冰上盡快寄送,1-2小時內送到并進行注射。
四、注意
1、仔細看細胞的說明書,不同細胞要用的培養基,培養的條件也是不一樣的;
2、全程需要注意無菌操作,瓶蓋放置高處,打開瓶蓋后不能觸碰瓶口或者從瓶蓋或敞口上方經過;重懸細胞時盡量避免氣泡產生;
3、接收后建議更換運輸用的培養基 (灌液培養基),請換用按照說明書細胞培養條件新配制的完全培養基來培養細胞。收到細胞后第一次傳代建議1:2傳代;
4、所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內操作,并請注意防護,所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
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