

下班回家的路上,我一直在思考:對于剛接觸這個領(lǐng)域的朋友,用什么比喻才能讓他們更容易理解宿主表達(dá)蛋白的過程呢?
靈光一現(xiàn),有了!
不同的宿主細(xì)胞,就像來自不同地區(qū)的人,各自說著獨特的“方言”(即密碼子使用偏好)。雖然大部分“語言”(遺傳密碼)是共通的,彼此能聽懂,但總有一些特定的“詞匯”或“說法”(稀有密碼子),會讓對方完全摸不著頭腦。
想讓宿主細(xì)胞忠實執(zhí)行你的指令去表達(dá)蛋白,第一步就是要讓它“聽懂”——你必須用它能理解的“方言”(合適的密碼子)來下達(dá)指令。經(jīng)過密碼子優(yōu)化的基因,就好比內(nèi)容本身沒問題了。但如果你“態(tài)度”不好、“禮數(shù)”不周(表達(dá)載體設(shè)計不佳),宿主照樣會“不理你”。這里的“態(tài)度”和“禮數(shù)”,指的就是基因“安置”的規(guī)范性,比如啟動子的選擇是否匹配,終止子、核糖體結(jié)合位點等表達(dá)元件(表達(dá)框)的搭配是否合理。
這些都安排妥當(dāng)了,你還得提供“好酒好菜”(適宜的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件)招待它,讓它“吃好喝好”(營養(yǎng)充足),處于最舒適、最“愉悅”(生理狀態(tài)最佳)的狀態(tài)。
即使你前面都做到了,最終能否成功表達(dá)出理想的蛋白,還要看宿主細(xì)胞自身的“能力”(如代謝狀態(tài)、折疊能力),以及目標(biāo)蛋白本身的“性格”(如是否易聚集、是否對宿主有毒性等)。