在細(xì)胞生物學(xué)研究中，準(zhǔn)確評(píng)估細(xì)胞活力是了解細(xì)胞增殖、代謝狀態(tài)以及藥物作用效果的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。細(xì)胞活力檢測(cè)方法眾多，其中CCK-8和MTT是兩種廣泛應(yīng)用的比色法檢測(cè)手段。它們通過檢測(cè)細(xì)胞代謝活性來(lái)反映細(xì)胞的生存狀態(tài)，那么，我們究竟該如何選擇呢？下文將對(duì)這兩種檢測(cè)方法作出比較。
原理PK
CCK-8：是WST-8在電子耦合載體1-Methoxy PMS存在的情況下被線粒體內(nèi)的脫氫酶還原成水溶性的橙黃色甲臜產(chǎn)物（formazan）。通過酶標(biāo)儀測(cè)量細(xì)胞液的OD值便可檢測(cè)出待測(cè)細(xì)胞樣品的活性。
CCK-8細(xì)胞活性檢測(cè)原理圖
MTT: 是利用活細(xì)胞的線粒體脫氫酶在代謝過程中將黃色的可溶性四唑鹽MTT還原為不溶于水的藍(lán)紫色產(chǎn)物-甲臜(Formazan)晶體。使用合適的溶解液如DM SO溶解沉積在細(xì)胞中的甲臜晶體，通過酶標(biāo)儀測(cè)量細(xì)胞液的OD值便可檢測(cè)出待測(cè)細(xì)胞樣品的活性。
MTT胞活性檢測(cè)原理圖
操作流程PK
CCK-8和MTT操作流程圖
使用MTT法進(jìn)行活力檢測(cè)時(shí)，生成的甲臜產(chǎn)物需要用DMSO溶解，顆粒不完全溶解或者在吸取上清操作過程中帶走部分細(xì)胞等情況，往往會(huì)導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果穩(wěn)定性查、重復(fù)性差等一系列問題，有的期刊可能質(zhì)疑數(shù)據(jù)的正確性。
CCK-8生成的甲臜產(chǎn)物是水溶性的，可直接測(cè)定OD值，不存在不完全溶解和產(chǎn)物被帶走的情況，可以完全避免MTT法在操作上帶來(lái)的誤差。
靈敏度PK
CCK-8使用的WST-8染料被還原后生成水溶性橙黃色甲臜，其線性范圍更寬，可檢測(cè)更低細(xì)胞密度（如100個(gè)細(xì)胞/孔），尤其適合低細(xì)胞數(shù)實(shí)驗(yàn)。
MTT生成的非水溶性藍(lán)紫色甲臜需DMSO溶解，部分結(jié)晶可能丟失，導(dǎo)致信號(hào)減弱，靈敏度相對(duì)較低。
細(xì)胞毒性PK
CCK-8：細(xì)胞毒性較低，對(duì)細(xì)胞的生理狀態(tài)影響較小，適合長(zhǎng)時(shí)間培養(yǎng)和連續(xù)監(jiān)測(cè)。
MTT：可能對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生一定的毒性，尤其是在長(zhǎng)時(shí)間培養(yǎng)或高濃度使用時(shí)，可能影響細(xì)胞的正常生長(zhǎng)和代謝。
綜上所述，CCK8檢測(cè)法靈敏度高、檢測(cè)快速以及操作簡(jiǎn)便，且細(xì)胞毒性較低，是更優(yōu)的選擇。
附：CCK8細(xì)胞活力檢測(cè)的經(jīng)驗(yàn)
1.起始細(xì)胞接種數(shù)量：以使用標(biāo)準(zhǔn)96孔板為例，貼壁細(xì)胞的最小接種量至少為1,000 個(gè)/孔 (100 μL 培養(yǎng)基)。如果檢測(cè)白細(xì)胞，靈敏度相對(duì)較低，因此推薦接種量不低于2,500 個(gè)/孔 (100 μL 培養(yǎng)基)。
2.CCK-8加入劑量：一般建議為按培養(yǎng)體系的10%添加，添加過程中應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。
3.細(xì)胞孵育時(shí)間：孵育時(shí)間一般為1-4小時(shí)，一般懸浮細(xì)胞孵育的時(shí)間要長(zhǎng)于貼壁細(xì)胞，由于CCK-8的OD值處在1.0左右是比較好的檢測(cè)結(jié)果，建議實(shí)驗(yàn)者可以每隔0.5h測(cè)定一次OD值，以摸索出最佳孵育時(shí)間。
4.檢測(cè)波長(zhǎng)：如果沒有450 nm的濾光片，可以使用吸光度在430-490 nm之間的濾光片，但是450 nm濾光片的檢測(cè)靈敏度高。
5.CCK-8對(duì)細(xì)胞的毒性：CCK-8毒性非常低，檢測(cè)完后相同的細(xì)胞可以繼續(xù)進(jìn)行其它細(xì)胞增殖檢測(cè)，如結(jié)晶紫染色法、中性紅染色法或DNA熒光染色法等。
產(chǎn)品訂購(gòu)
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應(yīng)用類型 |
產(chǎn)品名稱 |
貨號(hào) |
規(guī)格 |
目錄價(jià) |
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細(xì)胞活力檢測(cè) |
C331301E |
100T |
140.00 |
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C331301S |
500T |
450.00 |
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C331301M |
1000T |
860.00 |
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C331301L |
3×1000T |
1710.00 |
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C331301T |
10×1000T |
4800.00 |