主動脈病變常見于心血管系統疾病或代謝類疾病,如動脈粥樣硬化、主動脈夾層、肥胖癥、糖尿病、高血壓、瓣膜疾病、主動脈瘤等,或介入類操作的并發癥。動物實驗作為臨床診療的重要支撐,已經得到全面而廣泛的應用,而其中嚙齒類動物實驗居各種動物實驗首位。嚙齒類動物實驗中,常用的小鼠和大鼠品系選擇多,其有體型小、易于飼養管理、性情溫順、成本低廉等優點。然而實驗鼠體型較小,其脈管系統也更微細,對實驗鼠脈管系統的實驗操作更考驗實驗人員的操作技術。
深圳靈賦拓普生物科技有限公司動物技術團隊在實驗鼠全主動脈取材方面擁有精湛的技術以及豐富的經驗,今天我們就來分享實驗鼠全主動脈如何取材。
實驗鼠深度麻醉后,左心室灌注清洗和保護主要動脈血管,并剔除多余臟器,剪除胸腺暴露心耳和主動脈弓;先分離頭臂干,然后自起始部離斷右鎖骨下動脈,繼續向遠心端分離右頸總動脈至合適長度;之后依次分離左頸總動脈和左鎖骨下動脈至合適長度;后續延降主動脈、胸主動脈、腹主動脈繼續分離血管,自起始部離斷肋間動脈、支氣管支等分支血管,僅分離和保留左右腎動脈合適長度,至分離出左右髂總動脈合適長度結束。最后將已完全游離的血管,自右頸總動脈開始依次離斷,獲得完整的主要動脈血管,迅速置于保存液中用于后續實驗。
成功獲取的實驗鼠全主動脈用途很廣。如動脈粥樣硬化模型,主動脈內膜、肌層甚至外膜都有脂肪浸潤,可用大體油紅O染色方法對管壁脂肪進行顯影染色,之后拍照、對油紅O染色區域進行定量及統計分析。將取好的主動脈進行液氮速凍做冰凍切片,亦可做鏡下油紅O染色。本文提及的特殊染色,靈賦拓普均可提供染色區域定量分析及統計繪圖服務。
圖1 全主動脈大體油紅O染色(內壁面)
圖2 主動脈瓣冰凍切片后油紅O染色
又如主動脈夾層模型,由于取材前模型灌注僅能清除管內血液,夾層內的血液或血凝塊無法清除,取材后無需染色,肉眼即可看見夾層區域。同樣可進行定量統計分析。
圖3 主動脈夾層及對照樣本(A正常樣本,B病變樣本)
取好的主動脈進行福爾馬林固定,制成石蠟切片,還可以使用茜素紅染色和Von Kossa染色觀察主動脈管壁鈣化程度。
圖4 茜素紅染色及Von Kossa染色對鈣鹽沉積的顯影作用
還可以取病變局部區域進行常規分子實驗,如蛋白電泳、實時熒光定量PCR、組學檢測等等,可以說是“一管在手,Paper我有”了。
【參考文獻】
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[3]bilibili.com/video/BV1v84y1D7ZX
