293T細(xì)胞最初稱為293tsA1609neo，是293 [HEK-293]細(xì)胞株插入了SV40 T-antigen的溫度敏感基因形成的高轉(zhuǎn)衍生株。
一、細(xì)胞基本信息
【細(xì)胞名稱】人胚腎細(xì)胞
【細(xì)胞別名】Hek293T; HEK-293T; HEK 293T; HEK-293-T; HEK 293 T; 293-T; 293 T; 293T; Human Embryonic Kidney 293T; 293tsA1609neo
【種屬來(lái)源】人
【組織來(lái)源】腎
【細(xì)胞形態(tài)】上皮細(xì)胞樣
【生長(zhǎng)特性】貼壁生長(zhǎng)
【培養(yǎng)體系】MEM+10%FBS+1%P/S
【傳代比例】1:2~1:4，每 2-3 天換液一次
【培養(yǎng)條件】氣相：95%空氣+5%二氧化碳，溫度：37℃
【凍存條件】?jī)龃嬉海?0%基礎(chǔ)培養(yǎng)基+30%FBS+10%DMSO；存儲(chǔ)條件：液氮
【安全性】建議在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并做好個(gè)人防護(hù)。
二、復(fù)蘇及傳代方法
/ 金源康生物 /
1、細(xì)胞株的復(fù)蘇（凍存管）
1.將凍存管在37℃水浴鍋中迅速完全融化，并適當(dāng)輕輕搖晃促融?？焖?、完全融化可以提高細(xì)胞的復(fù)蘇效果。
2.打開(kāi)凍存管前時(shí)用75%酒精擦拭細(xì)胞凍存管外壁。
3.將完全融化的細(xì)胞直接離心，或者轉(zhuǎn)移至無(wú)菌15ml或其它合適無(wú)菌離心管中，400g離心5min，吸除上清，注意不要吸走細(xì)胞沉淀，然后用新鮮完全培養(yǎng)液重懸后轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)器皿，混勻，置于CO2培養(yǎng)箱37℃培養(yǎng)。
4.第二天視貼壁或生長(zhǎng)狀態(tài)，更換培養(yǎng)液。
注意：如果收到的凍存管不能及時(shí)進(jìn)行復(fù)蘇，還請(qǐng)置于-80℃或液氮中進(jìn)行暫存，并盡快復(fù)蘇進(jìn)行培養(yǎng)。
/ 金源康生物 /
2、細(xì)胞株的復(fù)蘇（T25瓶）
1.將收到T25瓶脫外包后用75%酒精擦拭瓶外壁。
2.置于倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)，看是否有異常；無(wú)異常后，采用移液器移去多余的培養(yǎng)液，置于CO2培養(yǎng)箱37℃培養(yǎng)過(guò)夜。
3.第二天視貼壁或生長(zhǎng)狀態(tài)，考慮進(jìn)行換液或傳代，傳代比例參考1:2~1:4。
三、注意事項(xiàng)
1、每支凍存管約含1×106個(gè)細(xì)胞，體積為1ml，預(yù)期存活率60-90%，建議復(fù)蘇至1個(gè)T25瓶或1個(gè)6cm培養(yǎng)皿中。如果復(fù)蘇后存活率較低，可以消化后轉(zhuǎn)移至3.5cm培養(yǎng)皿/T12.5瓶中，這樣細(xì)胞生長(zhǎng)會(huì)更好。
2、如果本產(chǎn)品是常溫運(yùn)輸，并且是培養(yǎng)瓶中充滿完全培養(yǎng)液的貼壁細(xì)胞，收到細(xì)胞后：
（1）及時(shí)拍照記錄有無(wú)漏液/瓶身破損現(xiàn)象。
（2）用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。先不要打開(kāi)培養(yǎng)瓶蓋，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2~4小時(shí)，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
（3）仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書(shū)，了解細(xì)胞相關(guān)信息。
（4）靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)。
3、如果細(xì)胞密度超過(guò)85%請(qǐng)盡快進(jìn)行傳代操作；如果懸浮的細(xì)胞較多，請(qǐng)將培養(yǎng)瓶置于培養(yǎng)箱中靜置過(guò)夜以使懸浮的細(xì)胞再次貼壁。如果收到的是常溫運(yùn)輸?shù)碾x心管裝的懸浮細(xì)胞，可以直接取出轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。若培養(yǎng)液顏色正常則保留培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，并且在首次更換培養(yǎng)液時(shí)，保留一半原培養(yǎng)液，并加入一半新鮮培養(yǎng)液，這樣可以盡量避免由于培養(yǎng)液或血清差異導(dǎo)致細(xì)胞生長(zhǎng)的不適應(yīng)，確保細(xì)胞良好的生長(zhǎng)狀態(tài)。
4、細(xì)胞培養(yǎng)請(qǐng)?jiān)谏锇踩衽_(tái)中進(jìn)行操作，并嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作。