1、250 μM Pb(NO3)2處理BY-2細胞10 h
2、250 μM Pb(NO3)2+0.5 μM SNP處理BY-2細胞10 h
3、250 μM Pb(NO3)2+100 μM cPTIO處理BY-2細胞10 h
4、0.5 μM SNP、100 μM cPTIO實時處理
本研究用250 μM Pb (NO3)2處理4日齡煙草BY-2細胞，立即用NMT測定Pb2+流速。250 μM Pb (NO3)2處理后，Pb2+內(nèi)流速率恒定，平均值為70.40±2.70 pmol cm-2·s-1（圖1A）。添加0.5 μM SNP后，Pb2+內(nèi)流顯著增加，達到160.56±32.83 pmol cm-2·s-1，顯著增加128.06%。與單獨Pb處理相比，100 μM cPTIO處理顯著抑制了Pb2+的內(nèi)流，甚至出現(xiàn)6.75±0.85 pmol cm-2·s-1的Pb2+凈外排（圖1A, B）。這些結(jié)果表明，在短時間內(nèi)，SNP或cPTIO的存在顯著改變了Pb (NO3)2處理下的的Pb2+流速。
圖1. Pb脅迫下施用SNP和cPTIO前后NO對煙草BY-2細胞Pb2+流速的影響。正值代表Pb2+外排，負值代表Pb2+內(nèi)流。
研究還測定了長期不同處理的細胞中Pb2+流速。如圖2所示，單獨Pb處理10 h時，煙草BY-2細胞內(nèi)有Pb2+內(nèi)流，其平均內(nèi)流速率為34.94±2.98 pmol cm-2·s-1。添加SNP后，Pb2+平均流速顯著增加，達到88.98±10.38 pmol cm-2·s-1。SNP存在時Pb2+流速的平均值約為單獨Pb處理的2.55倍。然而， cPTIO處理下的細胞Pb2+外排速率最小，平均值為0.37±2.83 pmol cm-2·s-1。上述結(jié)果表明，NO增強了Pb2+向細胞內(nèi)流入。
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圖2. 不同處理10 h后NO對煙草BY-2細胞中Pb2+流速的影響。正值代表Pb2+外排，負值代表Pb2+內(nèi)流。
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鈣作為營養(yǎng)和信號分子，在植物的各種生命活動中發(fā)揮著重要作用。在這項工作中，NO促進了Pb2+的流入并參與了BY-2懸浮細胞對Pb的吸收。我們進一步檢測了NO對Pb誘導(dǎo)的Ca2+流速變化的影響。如圖3所示，對照細胞檢測到Ca2+流入煙草BY-2細胞，其平均值為13.54±2.78 pmol cm-2·s-1
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