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熒光素酶(luciferase)是生物體內催化熒光素或脂肪醛氧化發光的一類酶的總稱。作為一種生物發光技術中的標記物,熒光素酶已經被廣泛地應用于分子生物學領域。
銳賽生物擁有以哺乳動物真核載體為基礎的報告基因質粒系統。報告基因質粒中包含了多種信號通路中的轉錄因子的結合位點、熒光素酶（Luciferase）或海腎熒光素酶（Renilla Luciferase）等調控元件。5月銳賽特別推出雙熒光素酶報告基因檢測促銷活動，為您的生物學研究助力！
雙熒光素酶報告基因檢測介紹
實驗原理
miRNA通過堿基配對結合到靶mRNA的3’UTR區，抑制靶基因的翻譯或對靶基因mRNA的降解達到調控基因表達的目的。將靶mRNA的3’UTR區構建至螢火蟲熒光素酶報告基因的3’端，與miRNA表達載體及海腎熒光素酶報告基因載體共轉染細胞，先后加入兩種底物熒光素，通過對熒光素酶報告基因的表達檢測確認miRNA對靶基因的調控效果。下圖為雙熒光素酶報告基因檢測載體的示意圖。
雙熒光素酶報告基因檢測系統示意圖
技術應用
通過miRNA靶標的鑒定從而進行miRNA功能的深入研究。
實驗流程
實驗結果展示
圖 1 hsa-miR-9-1 的靶點篩選結果
1）四組質粒的 293 細胞共轉染后的細胞照片；2）四組細胞的雙熒光素酶報告基因檢測柱形圖。
注：WT為野生型3'UTR 區的螢火蟲熒光素酶報告基因質粒，Mut為突變型3'UTR 區的螢火蟲熒光素酶報
告基因質粒，結果表明待研究的 miRNA 對靶基因有較明顯的調控作用。
TROUBLESHOOTING
常見問題FAQ
Q ：有哪些數據庫可對miRNA的靶基因進行預測分析？
A ：根據miRNA 5‘ 端2-8個核苷酸可與靶mRNA 3‘ UTR區完全互補這一特點，結合miRNA與靶基因形成二聚體的熱力學穩定性和二級結構進行分析，有如下數據庫的預測分析結果可供參考：
Q ：熒光素酶報告基因有哪些特點？有哪些應用？
A ：在熒光素酶的催化下，熒光素可被氧化并釋放光子，可用熒光檢測儀對熒光定量測定。熒光素酶檢測系統具有非***性，靈敏度高的特點。熒光素酶咋哺乳動物細胞中的半衰期為3小時，半衰期短不發生積累，故調控元件的改變會即時導致熒光素酶活性的改變，可進行快速方便的分析。我們把感興趣的基因轉錄的調控元件克隆在熒光素酶報告基因的上游或下游，構建成報告基因質粒，即可進行啟動子、增強子的活性研究，miRNA的靶點篩選工作。
Q ：熒光素酶的發光波長是多少？
A ：螢火蟲熒光素酶催化luciferin發光的最強發光波長為560nm。海腎熒光素酶催化coelenterazine發光的最強發光波長為465nm。
Q ：熒光素酶檢測系統需要制備標準曲線嗎？
A ：一般不需作標準曲線。熒光素酶檢測系統用于比較樣品的相對活性。
Q：雙熒光素酶報告基因系統有何優點?
A：在雙熒光素酶報告基因測試中,將螢火蟲熒光素酶作為實驗報告基因,海腎熒光素酶作為對照報告基因。實驗報告基因用于測試實驗條件下基因的表達,而對照報告基因作為內對照,以使實驗報告基因測試的結果歸一化。作歸一化可消除實驗過程中減弱實驗準確度的變化,如培養細胞的數量、細胞轉染及裂解的效率等。
Q ：熒光素酶報告基因與GFP的區別是什么？
參考文獻
1. Lee DY, Deng Z,Wang CH, et al.MicroRNA-378 promotes cell survival, tumor growth, and angiogenesis by targetingSuFu and Fus-1 expression.PNAS 2007,(104):20350-20355.
2. Dong F, Lou D. MicroR NA-34b/c suppresses uveal melanoma cell proliferation and migration through multipletargets.Molecular Vision 2012,(18):537-546.
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