編者按
當前，三陰性乳腺癌（TNBC）作為最具侵襲性和治療挑戰性的乳腺癌亞型之一，在乳腺癌的諸多分型中堪稱“癌王”。它易轉移復發，且對許多常規療法不敏感，治療選擇有限，患者預后極差。近年來，嵌合抗原受體（CAR）T細胞療法在多種癌癥中顯示出巨大潛力，但卻常常面臨著腫瘤抗原逃逸、腫瘤異質性等挑戰。
3月3日，中國科學院深圳先進技術研究院萬曉春教授研究團隊聯合中國科學院大學、陸軍軍醫大學陸軍特色醫學中心（大坪醫院）消化內科、環特生物等在權威期刊Experimental Hematology & Oncology（IF=13.5）上發表最新研究成果。該研究開發了一種新型的雙靶向CAR-T細胞療法——BiTES-CAR-T，可以同時靶向MSLN和NKG2DL，并首次在斑馬魚TNBC異種移植模型中驗證了該療法的抗腫瘤活性，有效克服了TNBC的抗原異質性和潛在的免疫逃逸，是一種極具潛力的三陰性乳腺癌（TNBC）治療策略，具有良好的轉化應用前景。
本研究中，環特生物提供的斑馬魚PDX等實驗服務支持，進一步驗證了BiTEs CAR-T可以顯著降低腫瘤熒光強度，展現出對TNBC的顯著療效。
01、研究亮點
提出了一種新型CAR-T策略——雙特異性BiTES-CAR-T，具有低免疫原性、高穩定性、雙靶向殺傷能力，用于治療三陰性乳腺癌（TNBC）；
通過細胞、小鼠等多模型驗證該療效，并首次在斑馬魚TNBC異種移植模型中驗證了該療法的抗腫瘤活性，表明其巨大的臨床轉化潛力；
采用納米抗體和NKG2D胞外區設計，降低了免疫原性，提高了穩定性，為三陰性乳腺癌治療提供了新視角。
02、主要研究成果
1. 核心策略：雙特異性BiTES-CAR-T的開發
針對TNBC治療中腫瘤抗原異質性和免疫逃逸兩大挑戰，研究人員開發了一種新型的雙特異性T細胞銜接器(BiTES)分泌型CAR-T細胞——BiTES-CAR-T，可以同時靶向間皮素（MSLN） 和NKG2D配體（NKG2DL） 。
TCGA數據庫分析顯示，TNBC組織中MSLN和NKG2DL表達高，但相關性弱；免疫組化驗證結果顯示，71.05%的TNBC樣本中MSLN呈陽性，55.26%的樣本中MICA/B呈陽性，而僅有15.79%的樣本中，兩者均為陰性。MSLN相對更特異于腫瘤；NKG2DL可能被感染或由化療誘導產生。
圖1
2. BiTES-CAR-T的構建
隨后，研究人員使用結構小、穩定且免疫原性低的納米抗體（VHH）來靶向MSLN，并以NKG2D天然受體的胞外域替代傳統scFv來靶向NKG2DL，顯著降低了CAR-T細胞的免疫原性和聚集風險，提高了穩定性，并成功構建了BITES CAR-T細胞。
流式細胞術(FACS)顯示出T細胞表面MSLN CAR的表達；Western Blot和ELISA證實了培養上清液中，存在BITES的分泌；BITES CAR-T的轉導效率略低于MSLN CAR-T，但CD4/CD8比例無顯著變化。
3. BiTES-CAR-T的功能驗證與體外殺傷效果
研究人員發現，分泌的BiTES能高效地與T細胞上的CD3和腫瘤細胞上的 NKG2DL結合。BiTEs CAR-T在共培養實驗中，表現出比單靶向MSLN CAR-T更強的細胞毒性，并能有效激活未轉導的T細胞，提升其殺傷能力。
在模擬抗原異質性的混合腫瘤細胞中，BiTEs CAR-T能顯著提升IFN-γ、TNF-α、顆粒酶等細胞因子的分泌水平，并增強T細胞表面激活標志物CD25和CD69的表達。
4. 斑馬魚、小鼠模型驗證其可以顯著抑制腫瘤生長
研究人員構建了斑馬魚TNBC異種移植模型，首次在斑馬魚中評估BiTES CAR-T的療效。實驗結果顯示，BITES CAR-T顯著降低了腫瘤熒光強度，表明其可以有效誘導腫瘤消退。
隨后，通過構建小鼠TNBC模型，在小鼠模型中進一步證實了其療效。實驗結果顯示，BiTES CAR-T有效減小了腫瘤體積，并延長了生存期，優于MSLN CAR-T，但未觀察到顯著的體重下降。這表明能顯著抑制腫瘤生長、延長生存期，且未引起明顯毒性反應，其毒性可控。治療后小鼠血液中IFN-γ水平和CD3+ T細胞比例均顯著升高，表明其具有良好的體內持久性與活性。
圖2
本研究中，環特生物提供了斑馬魚PDX等實驗服務支持，多維度驗證了BiTES CAR-T強大的抗腫瘤活性和安全性。
03、編者點評
本研究首次開發了一種新型的CAR-T策略——雙特異性BiTES-CAR-T，可以同時靶向MSLN和NKG2DL，有效克服了TNBC的抗原異質性和潛在的免疫逃逸，并利用斑馬魚等體內外實驗證實了其對TNBC的強大抗腫瘤活性和安全性。BiTES CAR-T作為一種極具潛力的TNBC治療策略，具有良好的轉化應用前景。
作為健康美麗產業CRO服務開拓者與引領者、斑馬魚生物技術的全球領導者，環特生物搭建了“斑馬魚、基因編輯、類器官、哺乳動物、人體”等多維生物技術服務體系，開展健康美麗CRO服務、科研服務、智慧實驗室搭建三大業務。目前，環特已建立200多種斑馬魚模型，腦類器官、胃癌、心臟類器官及各種腫瘤類器官培養平臺，歡迎有需要的讀者垂詢！
參考文獻：
Muhammad Auwal Saliu, Qi Wang,Xiaochun Wan et al. Mesothelin-targeted CAR-T cells secreting NKG2D-BiTEs exhibit potent efficacy against triple-negative breast cancer. Experimental Hematology & Oncology.2025. DOI: 10.1186/s40164-025-00621-y