抗體熒光標記沒你想象那么難

免疫學實驗中，我們經常需要將抗體標記上酶或者熒光素，大部分科研工作者一提到熒光標記往往會很畏懼，主要原因是不知道如何下手，參照一些文獻的方法和步驟做出來的結果往往不盡如人意，往往讓實驗人員畏而束手。

抗體的標記確實有一些麻煩和一些小技巧，但其絕不是太神秘的事情。

首先，你需要了解你所需要的標記物的特性，選擇合適的帶活性標記物（HRP酶，生物素或者熒光染料），對活性的標記物要清楚其溶解性(脂溶性還是水溶性)、保存要求、活性位點化學反應特性等等。有些熒光染料有較為苛刻的要求，一定要防潮，一旦遇到水活性鍵在幾分鐘內或幾小時內完全失活，脂溶性的染料一般用DMSO,DMF類有機溶劑溶解，一定要確保其不含水分。在保存上所有熒光染料都要求避光，使用和反應過程都要盡量避光。活性染料的活性鍵與抗體的反應基團必須要清楚，這樣才能保證給其提供最適宜的反應條件。

再次，關于抗體。抗體的純度要好，特異性和溶解性也要好，盡量不要有變性抗體和沉淀物。其溶解的溶液環境最好為無機鹽(比如PBS環境)，處于一個合適穩定的PH環境，溶液中不含有游離的可干擾反應的官能團，比如，大部分的活性染料是與抗體的伯氨基（-NH2）反應，所以溶液中一定不能含有帶伯氨基的化學物質(比如游離的氨基酸，游離肽，或者Tris之類的)，我們純化抗體過程需要大量使用這些試劑，在后期往往沒有去除干凈。也許有的小伙伴會說，我用PBS透析了很多次；其實透析次數不能說明問題，也不能說明你就一定透析干凈；怎么辦呢？加個標準參照，一些非活性的染料都可以作為參照指示劑，實在找不到合適的染料，加點藍墨水也可以，一般來說如果可以精確計算，顏料的摩爾數是預除去小分子的20倍為宜，透析或者超濾到看不到顏色，這個基本上可以保證您對游離小分子去除干凈。

第三，標記反應過程，標記反應的條件要是最適合于標記物化學反應的，而于此同時又不能損傷抗體的活性。對于標記緩沖液中同樣不能有游離基團或者抑制劑干擾反應；標記溫度和時長也要合理控制；標記物與抗體的比例要合適，不是越多越好。整個標記反應過程要避光，所使用接觸的所有的容器槍頭一定要干凈。

最后，標記反應完之后，殘留的未標記的標記物、有機溶劑一定要去除干凈（去除干凈的標準同抗體溶液環境中游離干擾物去除方法），同時，PH要調整到抗體最適的環境。必要的時候加入30&左右甘油和保護性的蛋白，分裝成小份-20℃保存。

說了這么多，估計很多小伙伴還是云里霧里。為此，福因德科技（Frdbio）將抗體標記簡化，標記過程所用到的試劑材料都按照最優組合在試劑盒中，只需要準備好抗體按照操作流程，最快30-45分鐘就可以完成標記，得到滿意的結果；當然了，如果購買了Frdbio系列試劑盒，如果初次實驗標記不成功，福因德科技可以免費幫你用您剩余的標記試劑盒幫您的標記完成。

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