??在生物制藥與基礎(chǔ)免疫學(xué)研究領(lǐng)域，單 B 細(xì)胞抗體開發(fā)技術(shù)已成為獲取高特異性、高親和力抗體的核心路徑。從技術(shù)本質(zhì)而言，其通過精準(zhǔn)分離單個 B 淋巴細(xì)胞，對編碼抗體的可變區(qū)基因進(jìn)行擴(kuò)增與解析，旨在還原天然抗體的重鏈（VH）與輕鏈（VL）配對，從而構(gòu)建具備完整功能的重組抗體。這一技術(shù)路徑雖在理論上具備顯著優(yōu)勢，卻在實(shí)際操作中遭遇諸多棘手難題。
單 B 細(xì)胞抗體開發(fā)的技術(shù)瓶頸與挑戰(zhàn)
微量樣本的擴(kuò)增難題
單 B 細(xì)胞內(nèi) RNA 含量極低，通常僅為 10 - 50pg，這對后續(xù)的逆轉(zhuǎn)錄及 PCR 擴(kuò)增提出了嚴(yán)苛要求。傳統(tǒng)的 RT - PCR 技術(shù)體系，在應(yīng)對如此微量的起始模板時，極易因引物競爭、酶活性抑制等因素，產(chǎn)生擴(kuò)增偏差或完全失敗，致使大量珍貴樣本中的目標(biāo)抗體基因信息丟失。據(jù)相關(guān)研究統(tǒng)計，在低起始量（＜50pg RNA）實(shí)驗(yàn)條件下，傳統(tǒng)方法的有效擴(kuò)增率不足 30%，嚴(yán)重制約了單 B 細(xì)胞抗體開發(fā)的效率與成功率 。
抗體可變區(qū)多樣性的覆蓋困境
B 細(xì)胞受體（BCR）可變區(qū)的多樣性源于復(fù)雜的基因重組、體細(xì)胞高頻突變等生物學(xué)過程，理論上可產(chǎn)生 10¹² - 10¹?種不同的抗體序列。這一高度復(fù)雜性使得常規(guī)引物設(shè)計難以全面覆蓋所有可變區(qū)。在實(shí)際篩選中，由于引物與部分稀有或突變型可變區(qū)序列不匹配，導(dǎo)致大量具有潛在治療價值的特異性抗體序列被遺漏。例如，在針對新型病毒的抗體篩選中，因可變區(qū)覆蓋不全，可能錯過關(guān)鍵的中和抗體序列。
流程復(fù)雜性與時間成本
傳統(tǒng)的單 B 細(xì)胞抗體開發(fā)流程，涵蓋細(xì)胞裂解、RNA 提取、逆轉(zhuǎn)錄、多重 PCR 擴(kuò)增以及產(chǎn)物純化等多個繁瑣步驟，且各步驟間需頻繁進(jìn)行樣本轉(zhuǎn)移與處理。整個流程耗時通常超過 12 小時，不僅操作誤差風(fēng)險高，而且長時間的樣本暴露增加了核酸降解與污染的可能性，進(jìn)一步降低了輕重鏈配對成功的概率。研究表明，傳統(tǒng)多步驟流程中，輕重鏈成功配對率平均僅為 50% -70%。
技術(shù)革新：單 B 細(xì)胞擴(kuò)增試劑盒的核心優(yōu)勢
德泰生物研發(fā)的 Mouse/Rabbit Single B Cell Amplification Kit，憑借前沿的技術(shù)設(shè)計，直擊上述技術(shù)痛點(diǎn)，為單 B 細(xì)胞抗體開發(fā)提供了高效、精準(zhǔn)的解決方案。
微量樣本的高效捕獲與擴(kuò)增
該試劑盒采用了自主研發(fā)的超敏細(xì)胞裂解與逆轉(zhuǎn)錄體系，突破性地實(shí)現(xiàn)了以 1 - 500 個 B 細(xì)胞或 10pg - 5ng 總 RNA 作為起始模板的高效擴(kuò)增。其核心在于運(yùn)用了專利的核酸保護(hù)技術(shù)，通過特殊的緩沖液配方抑制細(xì)胞內(nèi)源性 RNase 活性，同時優(yōu)化逆轉(zhuǎn)錄酶的反應(yīng)條件，確保在極低模板濃度下仍能維持高效的 cDNA 合成效率。
全面覆蓋抗體可變區(qū)多樣性
針對 BCR 可變區(qū)的復(fù)雜多樣性，試劑盒運(yùn)用了先進(jìn)的多重引物池設(shè)計策略。全面且精準(zhǔn)的引物設(shè)計，有效避免了因可變區(qū)序列變異導(dǎo)致的擴(kuò)增遺漏，使抗體可變區(qū)序列的覆蓋度達(dá)到 95% 以上，顯著提高了篩選出高特異性、高親和力抗體的概率 。
一體化擴(kuò)增流程與時間優(yōu)化
試劑盒采用三步法技術(shù)，將逆轉(zhuǎn)錄（RT）、預(yù)擴(kuò)增（PCR1）兩個關(guān)鍵步驟整合在同一反應(yīng)管內(nèi)進(jìn)行，這種一體化設(shè)計不僅避免了跨管操作帶來的樣本損失與污染風(fēng)險，還將整個實(shí)驗(yàn)流程大幅縮短至 5 小時以內(nèi)。實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，該試劑盒的輕重鏈同步擴(kuò)增成功率穩(wěn)定維持在 90% 以上，較傳統(tǒng)分管擴(kuò)增方法提升了約 40%，極大地提高了實(shí)驗(yàn)效率與結(jié)果可靠性 。
產(chǎn)品信息
貨號 產(chǎn)品名稱 產(chǎn)品規(guī)格
DTT06 小鼠單B細(xì)胞擴(kuò)增試劑盒 96 rxns
DTT07 兔單B細(xì)胞擴(kuò)增試劑盒 96 rxns
DTT08 小鼠單B細(xì)胞表達(dá)框擴(kuò)增試劑盒 96 rxns
DTT09 兔單B細(xì)胞表達(dá)框擴(kuò)增試劑盒 96 rxns