在蛋白電泳實(shí)驗(yàn)中,預(yù)制膠的選擇直接影響實(shí)驗(yàn)效率與結(jié)果準(zhǔn)確性。面對(duì)市場上預(yù)制膠產(chǎn)品體系的多元化發(fā)展及涌現(xiàn),作為科研工作者,你是否曾為 “Bis-Tris” 和 “Tris-Glycine” 這兩種預(yù)制膠的差異而困惑?本文將從技術(shù)溯源、分離范圍、緩沖體系等多個(gè)維度進(jìn)行對(duì)比,以期為您的科學(xué)選擇提供參考依據(jù)!
01 兩種體系的技術(shù)溯源
Tris-Glycine體系
在SDS-PAGE凝膠電泳技術(shù)發(fā)展初期,Tris-Glycine體系憑借穩(wěn)定的分離性能,成為實(shí)驗(yàn)室自配膠的核心選擇,長期主導(dǎo)手工制膠場景。然而其致命短板在于:傳統(tǒng)配方下凝膠常溫保質(zhì)期僅有1周,導(dǎo)致預(yù)制膠商業(yè)化開發(fā)陷入瓶頸。
Bis-Tris體系
2005年,Invitrogen公司推出基于Bis-Tris 體系的NuPAGETM預(yù)制膠,在 4℃下可穩(wěn)定保存1年,并以美國專利US6162338構(gòu)建技術(shù)壁壘。隨著專利到期,Bis-Tris技術(shù)擴(kuò)散, 成為眾多預(yù)制膠公司的凝膠配方。
傳承與創(chuàng)新
2018年,上海萬生昊天生物技術(shù)有限公司歷經(jīng)多年研發(fā),成功攻克 Tris-Glycine體系的穩(wěn)定性難題,推出可長期保存的新型預(yù)制膠產(chǎn)品, 并進(jìn)一步優(yōu)化。該技術(shù)在保留經(jīng)典體系適用性高、成本低的同時(shí),通過配方優(yōu)化將保質(zhì)期提升至行業(yè)主流水平, 同時(shí)克服了傳統(tǒng)Tris-Glycine體系處理小分子蛋白能力弱的缺點(diǎn)。這一成果不僅為科研用戶提供了兼顧傳統(tǒng)性能與便捷儲(chǔ)存的選擇,更標(biāo)志著本土企業(yè)在電泳技術(shù)國產(chǎn)化進(jìn)程中實(shí)現(xiàn)關(guān)鍵跨越。
02 分離范圍與分辨率
Tris-Glycine預(yù)制膠
分離范圍:傳統(tǒng)配方的Tris-Glycine PAGE膠可分離10-200 kD的蛋白。
分辨率:條帶清晰銳利。上海萬生昊天生物技術(shù)有限公司于2022年對(duì)經(jīng)典Laemmli配方成功進(jìn)行優(yōu)化升級(jí),取得突破性進(jìn)展——優(yōu)化后的Tris-Glycine預(yù)制膠能夠?qū)崿F(xiàn)對(duì)最小5 kD蛋白的分離。
Bis-Tris預(yù)制膠
分離范圍:可兼容MOPS或MES電泳緩沖液,能實(shí)現(xiàn)更寬范圍分子量蛋白的分離,搭配MOPS使用更好的分離大分子蛋白(>30 kD),搭配MES使用能更好的分離小分子蛋白(<30 kD)。
分辨率:條帶清晰銳利。
03 電泳速度與穩(wěn)定性
Tris-Glycine預(yù)制膠
電壓:180 V時(shí)間:60分鐘
電流動(dòng)態(tài):1塊膠的電流在75 mA左右,2塊膠的電流在150 mA左右,隨時(shí)間增加逐步降低。萬生昊天的Tris-Glycine 預(yù)制膠匹配超快電泳緩沖液,可實(shí)現(xiàn)200V 25分鐘超快電泳,極大提升實(shí)驗(yàn)效率。
Bis-Tris預(yù)制膠
電壓:150 V時(shí)間:40-50分鐘
電流動(dòng)態(tài):1塊膠的電流在80 mA左右,2塊膠的電流在140 mA左右,隨時(shí)間增加電流逐步降低。
04 緩沖體系與兼容性
Tris-Glycine預(yù)制膠
緩沖體系:Tris-Glycine 電泳緩沖液/超快電泳緩沖液。
pH范圍:7.0-9.0(最佳7.5-8.5),緩沖容量適中。
鹽離子耐受度:高
WB轉(zhuǎn)膜方式:半干轉(zhuǎn)或濕轉(zhuǎn)
Bis-Tris預(yù)制膠
緩沖體系:MOPS/MES緩沖液,穩(wěn)定性強(qiáng),不易降解。
pH范圍:6.0-8.5(最佳6.5-7.5),緩沖容量更高。
鹽離子耐受度:高
WB轉(zhuǎn)膜方式:濕轉(zhuǎn)
05 使用成本
Tris-Glycine預(yù)制膠采用普通的Tris-Glycine電泳緩沖液,價(jià)格便宜。
Bis-Tris預(yù)制膠匹配專用MOPS或者M(jìn)ES緩沖液,成本較高。
06 運(yùn)輸與保存
運(yùn)輸兩者均可常溫運(yùn)輸,建議收到后盡快轉(zhuǎn)入 4-8℃ 冰箱。
保質(zhì)期兩者均為12個(gè)月(4-8℃)。注意:兩者均需避免 0℃ 以下冷凍。凝膠凍凝會(huì)產(chǎn)生氣泡和裂紋,導(dǎo)致報(bào)廢!
總 結(jié)
Tris-Glycine與Bis-Tris體系的關(guān)鍵性能對(duì)比如下:
共性優(yōu)勢(shì)
兩體系在蛋白分辨率及預(yù)制膠保質(zhì)期等核心指標(biāo)上表現(xiàn)相當(dāng),均能滿足SDS-PAGE實(shí)驗(yàn)需求。
差異化競爭力
萬生昊天生物Tris-Glycine體系通過雙版本緩沖液實(shí)現(xiàn)全面領(lǐng)先:
a. 成本優(yōu)勢(shì)
常規(guī)電泳緩沖液:價(jià)格顯著低于Bis-Tris體系配套緩沖液。
超快電泳緩沖液:單價(jià)與Bis-Tris體系持平。
b. 效率突破
超快緩沖液在同等成本下,電泳速度較Bis-Tris體系提升50%以上。
綜上所述,無論從實(shí)驗(yàn)成本控制維度,還是時(shí)間效率優(yōu)化角度,萬生昊天Tris-Glycine體系均展現(xiàn)出更優(yōu)的性價(jià)比。建議根據(jù)實(shí)驗(yàn)場景靈活選擇常規(guī)版(預(yù)算敏感型)或超快版(高通量需求)解決方案。