01
前 言
基質(zhì)膠是3D細(xì)胞培養(yǎng)、類器官、成瘤、侵襲、血管生成等實驗的“萬能支架”。然而，從解凍到鋪板，從濃度選擇到結(jié)果判讀，稍不留神就可能“翻車”。翌圣生物結(jié)合上萬次實驗反饋，整理出這份“避坑指南”，助你一次上手，穩(wěn)拿高分?jǐn)?shù)據(jù)。
02
到貨 & 儲存
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問題 |
翌圣建議 |
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收到貨后如何保存？ |
將本產(chǎn)品置于-20℃環(huán)境存放；若短暫放置，4 ℃不超過7天。 |
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能否反復(fù)凍融？ |
不建議反復(fù)凍融；首次融化后立即分裝（200 µL/管），-20 ℃保存。 |
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如何進行融化？ |
冷凍狀態(tài)的基質(zhì)膠可以在操作前一天埋藏于碎冰中，再轉(zhuǎn)移入4 ℃冰箱，次日即可使用。適當(dāng)延長4℃融化時間可以有效減少基質(zhì)膠中的氣泡。 |
03
顏色/濃度怎么選？
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類型 |
特點 |
適用場景 |
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含酚紅 |
pH指示 |
常規(guī)實驗都可以使用含酚紅產(chǎn)品，由于酚紅存在時，在溫度、pH不同的情況下液體會出現(xiàn)顏色的差異，顏色可以在明黃色至暗紅色之間變化。 |
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無酚紅 |
無顏色干擾 |
涉及顏色檢測的實驗，推薦使用不含酚紅的基質(zhì)膠，如對子宮內(nèi)膜細(xì)胞培養(yǎng)必須使用不含酚紅的基質(zhì)膠。此外，酚紅是一種潛在的內(nèi)分泌干擾物，有可能會干擾實驗動物體內(nèi)激素的自然產(chǎn)生和代謝能力。 |
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標(biāo)準(zhǔn)濃度 |
蛋白濃度：8 - 12 mg/mL |
Transwell實驗、皮下成瘤實驗 |
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高濃度 |
蛋白濃度：18 - 22 mg/mL，凝膠3-5 min |
皮下成瘤中較難成瘤的細(xì)胞系 |
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低生長因子 |
標(biāo)準(zhǔn)濃度基質(zhì)膠的基礎(chǔ)上做了減生長因子處理 |
類器官培養(yǎng)、血管生成 |
04
實驗細(xì)節(jié)
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場景 |
高頻問題 |
解決錦囊 |
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皮下成瘤 |
荷瘤不成功可能的原因 |
取處于對數(shù)生長期的細(xì)胞，細(xì)胞達 80 - 90% 左右密度為宜 |
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選擇 4 - 6 周齡裸鼠，小于 4 周可能不耐受過早死亡，大于 6 周免疫力會增強，不易成瘤。 |
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可能是小鼠免疫排斥，建議更換免疫缺陷程度更大的小鼠 |
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可以在接種后一周補種1次，可以很好的提高成功率 |
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腫瘤長起來后又消失的原因 |
很可能是由于炎癥反應(yīng)，腫瘤細(xì)胞被小鼠自身吸收造成的。若后續(xù)腫瘤依舊未長出來，可考慮更換免疫缺陷程度更大的小鼠。 |
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血管生成 |
成管實驗中細(xì)胞 不能形成連續(xù)的網(wǎng)格 |
建議使用3-5代狀態(tài)較好且融合度70%-80%的HUVEC細(xì)胞 |
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細(xì)胞數(shù)量過少會使細(xì)胞無法形成連續(xù)的網(wǎng)絡(luò) |
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4 - 18 h可見血管生成。建議每4個小時觀察一次。 |
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侵襲實驗 |
細(xì)胞不轉(zhuǎn)移 |
細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移能力比較弱 |
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細(xì)胞的活性太差，活性不好的細(xì)胞做侵襲實驗難度較大 |
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用胰酶消化后，必須將含血清的培養(yǎng)基洗去 |
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類器官實驗 |
類器官傳代的標(biāo)準(zhǔn) |
不同類器官時間不同，通常7-14日、直徑100-200um左右可以傳代，有些發(fā)育慢的可能要數(shù)周才能發(fā)育到適合傳代狀態(tài)。 |
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鑒定類器官的方法 |
最基礎(chǔ)的通過顯微鏡和H&E染色觀察類器官形態(tài)；進一步可以用免疫熒光檢測該類器官是否表達相應(yīng)的biomarker； |
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為什么觀察到的形態(tài)卻和文獻不一致？ |
決定類器官形態(tài)的因素有很多，樣本來源是否相同、選用的細(xì)胞因子品質(zhì)是否有差異都有可能改變最終的類器官形態(tài)。 |
05
產(chǎn)品詳情
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產(chǎn)品名稱 |
貨號 |
規(guī)格 |
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Ceturegel® Matrix LDEV-Free基質(zhì)膠 |
40183ES |
1.5 mL/5 mL/10 mL |
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Ceturegel® Matrix Phenol Red-Free，LDEV-Free 基質(zhì)膠 |
40184ES |
1.5 mL/5 mL/10 mL |
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Ceturegel® Matrix GFR，LDEV-Free 基質(zhì)膠 |
40185ES |
1.5 mL/5 mL/10 mL |
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Ceturegel® Matrix GFR，Phenol Red-Free，LDEV-Free 基質(zhì)膠 |
40186ES |
1.5 mL/5 mL/10 mL |
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Ceturegel® Matrix High Concentration，LDEV-Free 基質(zhì)膠 |
40187ES |
1.5 mL/5 mL/10 mL |
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Ceturegel® Matrix High Concentration，Phenol Red-Free，LDEV-Free 基質(zhì)膠 |
40188ES |
1.5 mL/5 mL/10 mL |
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Ceturegel® Matrix High Concentration，GFR，LDEV-Free 基質(zhì)膠 |
40189ES |
1.5 mL/5 mL/10 mL |
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Ceturegel® Matrix hESC-Qualified，LDEV-Free 基質(zhì)膠 |
40190ES |
1.5 mL/5 mL/10 mL |
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Ceturegel® Matrix for Organoid culture，Phenol Red-Free，LDEV-Free 基質(zhì)膠 |
40191ES |
1.5 mL/5 mL/10 mL |
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Ceturegel® Matrix for Organoid culture，Phenol Red-Free，LDEV-Free Plus基質(zhì)膠 |
40192ES |
1.5 mL/5 mL/10 mL |