犬狂犬病毒抗原(RV-Ag)酶聯免疫分析（ELISA）
試劑盒使用說明書
本試劑僅供研究使用? ?????目的：本試劑盒用于測定犬血清，血漿及相關液體樣本中狂犬病毒抗原(RV-Ag)水平。
實驗原理：
? 本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯免疫法（ELISA）測定標本中犬狂犬病毒抗原(RV-Ag)。用純化的犬狂犬病毒抗原(RV-Ag)抗體包被微孔板，制成固相抗體，可與樣品中犬狂犬病毒抗原(RV-Ag)相結合，經洗滌除去未結合的抗原和其他成分后再與HRP標記的犬狂犬病毒抗原(RV-Ag)抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），與CUTOFF值相比較，從而判定標本中犬狂犬病毒抗原(RV-Ag)的存在與否。
試劑盒組成：
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試劑盒組成 |
48孔配置 |
96孔配置 |
保存 |
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說明書 |
1份 |
1份 |
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封板膜 |
2片（48） |
2片（96） |
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密封袋 |
1個 |
1個 |
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酶標包被板 |
1×48 |
1×96 |
2-8℃保存 |
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陰性對照 |
0.5ml×1瓶 |
0.5ml×1瓶 |
2-8℃保存 |
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陽性對照 |
0.5ml×1瓶 |
0.5ml×1瓶 |
2-8℃保存 |
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酶標試劑 |
3 ml×1瓶 |
6 ml×1瓶 |
2-8℃保存 |
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樣品稀釋液 |
3 ml×1瓶 |
6 ml×1瓶 |
2-8℃保存 |
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顯色劑A液 |
3 ml×1瓶 |
6 ml×1瓶 |
2-8℃保存 |
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顯色劑B液 |
3 ml×1瓶 |
6 ml×1瓶 |
2-8℃保存 |
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終止液 |
3ml×1瓶 |
6ml×1瓶 |
2-8℃保存 |
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濃縮洗滌液 |
（20ml×20倍）×1瓶 |
（20ml×30倍）×1瓶 |
2-8℃保存 |
樣本處理及要求：
1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如出現沉淀，應再次離心。
2. 血漿：應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應該再次離心。
3. 尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
4. 細胞培養上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
5. 組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。
6. 標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融.
7. 不能檢測含NaN3的樣品
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