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制備組織細(xì)胞裂解物是分離蛋白質(zhì)的一個(gè)重要步驟。組織細(xì)胞在特定的物理化學(xué)條件下，釋放部分或全部蛋白質(zhì)，通過(guò)離心等步驟加以分離，即可獲得蛋白質(zhì)溶液。這些蛋白可用于后續(xù)檢測(cè)，如：PAGE，蛋白印跡(Western Blot)，免疫沉淀(immnolprecipitation，IP)，免疫共沉淀(co-IP)和蛋白與多肽的分離純化等。要制備出優(yōu)質(zhì)的蛋白質(zhì)溶液，裂解液的選擇至關(guān)重要。
使用裂解液的主要目的有以下幾種：
1）、利用去污劑破壞脂質(zhì)雙分子層，破裂細(xì)胞；
2）、溶解蛋白；
3）、蛋白變性使其溶解；
4）、抑制蛋白酶活性。
裂解液中的成分及其作用：
1）、Tris-HCl pH 7.4（緩沖體系，使蛋白保持最佳活性和溶解狀態(tài)）
2）、NaCl（等滲體系，維持溶液滲透壓）
3）、EDTA（變性劑和穩(wěn)定劑，通過(guò)螯合金屬離子有效抑制蛋白酶的活性）
4）、Triton x-100（破壞細(xì)胞，充分裂解細(xì)胞，釋放蛋白）
5）、DTT（還原劑，防止蛋白通過(guò)巰基氧化聚合，增加蛋白的可溶性）
6）、Sodium deoxycholate（中度變性劑和蛋白溶解劑）
7）、SDS（強(qiáng)變性劑和蛋白溶解劑）
8）、尿素/硫脲(可以提高膜蛋白的融解）
9）、PMSF（強(qiáng)大的蛋白酶抑制劑）
10）、Aprotinin（蛋白酶抑制劑）
11）、Leupeptin（蛋白酶抑制劑）
調(diào)節(jié)裂解液中各個(gè)成分的配比，能使其在不同實(shí)驗(yàn)要求下達(dá)到最佳裂解效果。
針對(duì)組織蛋白及細(xì)胞全蛋白提取，我們?yōu)槟峁┝俗罴呀鉀Q方案。GOLD WIP組織及細(xì)胞蛋白裂解液能夠在非變性條件下裂解組織細(xì)胞，不僅可以用于細(xì)胞全蛋白的提取，也可直接用于大多數(shù)動(dòng)物組織的裂解。最有效地保護(hù)蛋白的同時(shí)保持蛋白原有的分子結(jié)構(gòu)和蛋白間相互作用。
使用說(shuō)明書(shū)：
組織細(xì)胞裂解液使用說(shuō)明書(shū).pdf
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