鴨坦布蘇病毒（DTMUV）是一種新興的黃病毒，給中國禽類產業帶來了重大經濟損失。快速準確檢測 DTMUV 對于有效防控措施至關重要。來自福建農林大學動物科學學院的研究團隊在《Animals》期刊發表了一種新型的現場檢測 DTMUV 的技術，其主要策略是將逆轉錄環介導等溫擴增（RT-LAMP）與 CRISPR/Cas12a 系統相結合。
研究發現，該技術可在 100 分鐘內靈敏特異地檢測含 DTMUV NS3 基因，最低檢測限為 19.3 拷貝 / 微升。該團隊成功將 RT-LAMP-CRISPR/Cas12a 檢測方法應用于 8 個鴨胚和 11 個雞胚成纖維細胞樣本的 DTMUV 診斷，檢測結果與 RT-qPCR 結果一致。值得一提的是，該研究中使用的工具酶srCas12a-18來自武漢尚睿生物科技有限公司，貨號為Cat No. SRB-CAS-001。研究表明，RT-LAMP-CRISPR/srCas12a-18 檢測方法可靠、靈敏、特異且用戶友好，有望用于 DTMUV 臨床樣本的早期現場檢測，便于及時干預和改善禽類產業疾病管理。
主要結果：
（1）RT-LAMP-CRISPR/Cas12a 檢測方法的建立：研究團隊成功開發了一種用于檢測鴨坦布蘇病毒（DTMUV）的 RT-LAMP-CRISPR/srCas12a-18 快速可視化檢測方法。該方法包括 RNA 快速提取、RT-LAMP 擴增、Cas12a 酶切反應以及熒光檢測，整個流程僅需約 100 分鐘。
（2）引物和 crRNA 的篩選：研究人員篩選出針對 DTMUV 高度保守的 NS3 基因的高效引物對和 crRNA，其中 NS3-crRNA-2 在不同 DTMUV 菌株中具有高度保守性，被選為檢測用 crRNA。
（3）檢測靈敏度評估：通過梯度稀釋含 DTMUV NS3 基因的克隆質粒，確定 RT-LAMP 擴增的檢測下限為 19.3 拷貝，RT-LAMP-CRISPR/srCas12a-18 檢測方法的靈敏度也達到 19.3 總拷貝，表明該方法具有高靈敏度。
（4）檢測特異性評估：使用含有 MDRV σC 基因的合成質粒作為對照，結果顯示該方法對 DTMUV 具有嚴格的特異性，無交叉反應。
（5）臨床樣本檢測驗證：對 8 個鴨胚和 11 個雞胚成纖維細胞樣本進行檢測，結果與 RT-qPCR 方法完全一致，準確率達到 100%，且該方法成本更低、操作更簡便，適合現場使用。
參考文獻：
Chen J, Tao D, Yang F, Pan C, Bao X, Xie S, Gong P, Zhao C, Lin R. Development of a Rapid Visual Detection Assay for Duck Tembusu Virus Using RT-LAMP-CRISPR/Cas12a. Animals 2024, 14(23), 3439; https://doi.org/10.3390/ani14233439