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索萊寶丨Western Blot整體解決方案
蛋白電泳 SDS-PAGE原理
SDS是一種陰離子表面活性劑，能打斷蛋白質(zhì)的氫鍵和疏水鍵，并按一定的比例和蛋白質(zhì)分子結(jié)合成復(fù)合物，使蛋白質(zhì)帶負(fù)電荷的量遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)其本身原有的電荷，掩蓋了各種蛋白分子間天然的電荷差異。因此，各種蛋白質(zhì)-SDS 復(fù)合物在電泳時(shí)的遷移率，不再受原有電荷和分子形狀的影響，而只是棒長(zhǎng)的函數(shù)。這種電泳方法稱為SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳（簡(jiǎn)稱SDS—PAGE）。實(shí)驗(yàn)使用過(guò)程中，還加入DTT或者巰基乙醇，以打開(kāi)蛋白間的二硫鍵，破壞蛋白質(zhì)的四級(jí)結(jié)構(gòu)。SDS—PAGE最常采用垂直板不連續(xù)系統(tǒng)（分離膠與濃縮膠）。
一、樣品制備
本公司有多種用于樣品制備的組織裂解液，每款裂解液會(huì)配備一管蛋白酶抑制劑pmsf。本公司還有多種蛋白酶抑制劑供您使用。
·實(shí)驗(yàn)試劑
產(chǎn)品貨號(hào) 產(chǎn)品名稱
R0010 高效RIPA_
R0020 普通RIPA
R0030 非變性組織細(xì)胞裂解液
A8260 Aprotinin 蛋白酶抑制劑（抑肽酶）
P8100 Pepstatin A 胃蛋白酶抑制劑
P1260 (All-in-one,100x)蛋白磷酸酶抑制劑混合物
T8031 Trypsin inhibitor 胰蛋白酶抑制劑
P1260 (All-in-one,100x)蛋白磷酸酶抑制劑混合物
539133 Protease Inhibitor Cocktail Set VI
539134 Protease Inhibitor Cocktail Set III
PC0030 Lowry法蛋白濃度測(cè)定試劑盒
PC0010 Bradford蛋白濃度測(cè)定試劑盒>
PC0020 BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒
注：本系列蛋白提取試劑所提取的蛋白由于含有去污劑，所以不適合于Bradford蛋白濃度測(cè)定試劑盒，請(qǐng)選擇BCA法或者Lowry法。
·蛋白提取
產(chǎn)品貨號(hào) 產(chǎn)品名稱 說(shuō)明
R0010 高效RIPA組織/細(xì)胞裂解液 在普通RIPA的基礎(chǔ)上改進(jìn)而來(lái),含蛋白酶抑制劑及磷酸 酶抑制劑(配有一支PMSF)
R0020 RIPA組織/細(xì)胞裂解液 RIPA經(jīng)典配方，適于絕大多數(shù)蛋白-蛋白相互作用的免 疫實(shí)驗(yàn)。組成： 50 mM Tris-HCl (pH 7.4), 150 mM NaCl, 1% NP-40, 0.1% SDS.(配有一支PMSF) 保存： 4 oC避光
R0030 非變性組織/細(xì)胞裂解液 非變性條件下裂解的蛋白產(chǎn)物最大限度地保留了蛋白 的特性和功能，如抗原-抗體結(jié)合或酶學(xué)活性，因此 適宜于進(jìn)行免疫共沉淀。
R0050 核蛋白提取試劑盒
BC3640 全蛋白提取試劑盒
BC3720 植物蛋白提取試劑盒
BC3710 全蛋白提取試劑盒（強(qiáng)）
BC3711 全蛋白提取試劑盒（中）
BC3730 磷酸化蛋白提取試劑盒
BC3740 胞漿蛋白提取試劑盒
蛋白含量測(cè)定是以標(biāo)準(zhǔn)蛋白作為對(duì)照，根據(jù)蛋白濃度不同，吸光值不同而達(dá)到定量的目的。有些方法是理解蛋白本身的吸光值（紫外光譜吸收法）來(lái)定量，但更多的是用染料對(duì)蛋白進(jìn)行染色，利用染料與蛋白結(jié)合顯出與原染料及蛋白不同的吸光值來(lái)定量的。后一種方法應(yīng)用更普遍。蛋白定量方法的選擇，應(yīng)該考慮到蛋白結(jié)構(gòu)（標(biāo)準(zhǔn)品選擇）、蛋白溶液內(nèi)干擾物等因素的影響。
·蛋白定量
產(chǎn)品貨號(hào) 產(chǎn)品名稱 組成說(shuō)明
PC0010 Bradford蛋白濃度測(cè)定試劑盒 5×G250染色液 100ml 2-8℃BSA(5 mg/ml) 1ml -20oC
PBS稀釋液 30ml 2-8℃ 干擾物質(zhì)少， Tris、糖、甘油、 巰基乙醇、氨、EDTA等均不干擾測(cè)定。
PC0020 BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒 BCA Reagent 100ml 2-8℃Cu Reagent 3.0ml 2-8℃BSA (5 mg/ml) 1ml -20oCPBS稀釋液 30ml 2-8℃ BCA法的顯 著優(yōu)點(diǎn)是不受去垢劑的影響。
PC0030 Lowry法蛋白濃度測(cè)定試劑盒 Folin酚甲試劑A 200ml 2-8℃Folin酚甲試劑B 5ml 2-8℃
Folin酚乙試劑 20ml 2-8℃BSA(5 mg/ml) 1ml -20oCPBS 稀釋液 30ml 2-8℃ Lowry法測(cè)定較為不受脂類物質(zhì)干 擾，適于脂類含量較高的樣品測(cè)定。也能耐受相當(dāng)濃度的 去垢劑如SDS。
二、蛋白電泳
·預(yù)制膠
SDS-PAGE如今已形成成熟的方案，實(shí)驗(yàn)室可根據(jù)自己的情況和習(xí)慣來(lái)選擇試劑。如選擇1、2、3、4、5、6、7、8、9全部試劑可自己配制。也可以選擇配制好的試劑。
系號(hào) 產(chǎn)品貨號(hào) 產(chǎn)品名稱 系號(hào) 產(chǎn)品貨號(hào) 產(chǎn)品名稱
1 T8060 TRIS 三羥甲基氨基甲烷 11 S1051 4XSDS-PAGE分離膠緩沖液（PH=8.8）
2 G8200 Glycine 甘氨酸 12 S1052 4XSDS-PAGE濃縮膠緩沖液（PH=6.8）
3 S8010 SDS 十二烷基硫酸鈉 13 P1016 4×蛋白上樣緩沖液(含β-巰基乙醇)
4 A8080 Acrylamide 丙烯酰胺 14 P1015 4×蛋白上樣緩沖液(含DTT)
5 M8200 N,N-Methylene Bisacrylamide甲叉雙丙烯酰胺 15 D1070 1M DTT
6 A8090 Ammonium Persulfate 過(guò)硫酸胺 16 A1030 10%過(guò)硫酸氨
7 D8220 DTT 二硫蘇糖醇 17 T1020 1M Tris-HCL (PH6.8)
8 M8210 β-Mercaptoethanol β-巰基乙醇 18 T1010 1.5M Tris-HCL(PH8.8)
9 T8090 TEMED 四甲基乙二胺 19 S1010 10%SDS
10 A1010 30%丙烯酰胺（29:1） 20 T1070 5×Tris-甘氨酸電泳緩沖液
·制膠
凝膠配制表（一）
分離膠12% 分離膠10% 分離膠8% 濃縮膠（3%）
總體積 10ml 10ml 10ml 5ml
4X分離膠緩沖液（PH8.8） 2.5ml 2.5ml 2.5ml 0
4X濃縮膠緩沖液（PH6.8） 0 0 0 1.25ml
30%丙烯酰胺(29:1) 4ml 3.3ml 2.7ml 0.5ml
ddH2O 3.4ml 4.1ml 4.7ml 3.2ml
10%過(guò)硫酸銨 100ul 100ul 100ul 75ul
TEMED 10ul 10ul 10ul 7.5ul
凝膠配制表（二）
分離膠12% 分離膠10% 分離膠8% 濃縮膠（3%）
總體積 10ml 10ml 10ml 5ml
30%丙烯酰胺(29:1) 4ml 3.3ml 2.7ml 0.5ml
1M Tris-HCL (PH6.8) 0 0 0 0.625ml
1.5M Tris-HCL(PH8.8) 2.5ml 2.5ml 2.5ml 0
10%SDS 100ul 100ul 100ul 50ul
ddH2O 3.3ml 4.0ml 4.6ml 3.75ml
10%過(guò)硫酸銨 100ul 100ul 100ul 75ul
TEMED 10ul 10ul 10ul 7.5ul
本公司的丙烯酰胺是29：1的，如需要定制其他規(guī)格的可以聯(lián)系我們。 為了客戶實(shí)驗(yàn)方便，我們生產(chǎn)的SDS-PAGE凝膠制備試劑盒（P1200）和Tris- Tricine-SDS-PAGE 凝膠制備試劑盒（P1320），后者主要用于小于10kd的蛋白和多肽的分離。包含了制膠的全部試劑，方便客戶操作。 如果您想節(jié)省時(shí)間，也可以使用我們的預(yù)制膠，無(wú)需配膠，直接跑電泳即可。
·上樣及電泳
本公司的上樣緩沖液既有用于非變性的（P1017、p1027）又有變性的（P1015、P1016、P1017、P1018），有不同的稀釋倍數(shù)，可以滿足客戶的多種實(shí)驗(yàn)需求。 電泳緩沖液既有用于普通的tris-甘氨酸緩沖系統(tǒng)的產(chǎn)品（T1070），又有用于Bis-tris這種系統(tǒng)的MOPS緩沖液（T1510） 蛋白marker有多種，非預(yù)染marker、預(yù)染marker、彩虹marker、Western Blot Marker。而且還有GE原裝的變性非變性marker，廣泛的分子量和用途供您選擇。
產(chǎn)品貨號(hào) 產(chǎn)品名稱 產(chǎn)品貨號(hào) 產(chǎn)品名稱
P1015 4×蛋白上樣緩沖液（含DTT） P1016 4×蛋白上樣緩沖液（含β-巰基乙醇）
P1018 2×蛋白上樣緩沖液（含DTT） P1019 2×蛋白上樣緩沖液（含β-巰基乙醇）
P1017 4×非變性蛋白上樣緩沖液 p1027 2×非變性蛋白上樣緩沖液
T1070 5×Tris甘氨酸電泳緩沖液 T1510 Tris-Mops緩沖液(10×)
PR1300-15 次高分子量蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn) 15T PR1400-20 低分子量蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)(14.4-97.4KD) 20T
PR1500-10 次高分子量蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn) 10T PR1600-20 預(yù)染低分子量蛋白質(zhì)(14.4-97.4KD) 20T
PR1700-10 預(yù)染次高分子量蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn) 10T PR1800-10 Western Blot Marker 10T(50ul）
PR1900 預(yù)染超低分子量蛋白marker（3.3-31KD) 20T PR1910 彩虹180廣譜蛋白marker 20T (100μ1)/50T(250μ1) /100T(500μ1)
PR1920 彩虹245廣譜蛋白marker 20T (100μ1)/50T(250μ1) /100T(500μ1) PR1930 彩虹245plus廣譜蛋白marker 20T (100μ1)/50T(250μ1) /100T(500μ1)
·染色
跑膠后的染色可以用銀染或者考染的方法，如果蛋白量少，推薦使用靈敏度高一些的銀染試劑盒（G7210），否則常規(guī)染色可以使用（P1305）和（P1300），其中P1300的優(yōu)點(diǎn)是染色時(shí)間短，半小時(shí)內(nèi)即可檢測(cè)到蛋白電泳條帶，節(jié)省了染色脫色的時(shí)間。
產(chǎn)品貨號(hào) 產(chǎn)品名稱
C8430 考馬斯亮藍(lán)R 250染色液
P1300 考馬斯亮藍(lán)蛋白膠快速染色液
P1305 考馬斯亮藍(lán)染色套裝
G7210
地 址： 北京市通州區(qū)馬駒橋聯(lián)東U谷景盛南四街85A三層 聯(lián)系人： 馬金成 電 話： 010-56371250 傳 真： 010-56371282 Email：2748554845@qq.com
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