MTT
產(chǎn)品名稱： MTT
英文名稱： MTT
產(chǎn)品編號(hào)：
產(chǎn)品價(jià)格： 詢價(jià)
產(chǎn)品產(chǎn)地： null
品牌商標(biāo)： null
更新時(shí)間： null
使用范圍： null
- 聯(lián)系人 : 無(wú)
- 地址 : 北京市經(jīng)濟(jì)技術(shù)開發(fā)區(qū)科創(chuàng)十三街18號(hào)院16號(hào)樓
- 郵編 : 100176
- 所在區(qū)域 : 北京
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?MTT（四唑藍(lán)）比色法是是一種檢測(cè)細(xì)胞存活和生長(zhǎng)的方法。其檢測(cè)原理為活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶甲瓚（Formazan）并沉積在細(xì)胞中，而死細(xì)胞無(wú)此功能。在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi)，MTT結(jié)晶形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比。MTT法廣泛用于抗腫瘤藥物篩選、細(xì)胞毒性試驗(yàn)等研究。
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實(shí)驗(yàn)方法：
? ? ? ? 1.?收集對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞懸液濃度，每孔加入50μl鋪板使待測(cè)細(xì)胞調(diào)密度?5000-?7500細(xì)胞/?孔。
? ? ? ? 2.??5%CO2，37℃孵育過(guò)夜，倒去培養(yǎng)液，加入濃度梯度的藥物。每個(gè)藥物設(shè)9個(gè)濃度梯度（30μmol/L,10μmol/L,3.33μmol/L,1.11μmol/L,0.37μmol/L,0.123μmol/L, 0.041μmol/L, 0.0137μmol/L, 0μmol/L），每孔50μl，每個(gè)濃度設(shè)2個(gè)重復(fù)，同時(shí)設(shè)DMSO和陽(yáng)性藥物（Taxol/Gemcitabine）對(duì)照組。
? ? ? ?3. ?5%CO2，37℃孵育72小時(shí)。
? ? ? ?4.?倒掉含藥培養(yǎng)基，每孔加入100μl?用無(wú)血清培養(yǎng)基配制的終濃度1mg/ml MTT?溶液，繼續(xù)培養(yǎng)4h。
? ? ? ?5. ?每孔加入溶解液25%SDS (Sodium Dodecyl Sulfate十二烷基硫酸鈉)+50%DMF 100μl，37℃孵育過(guò)夜。
? ? ? ?6.?用synergy 4多功能讀板機(jī)于OD570nm讀取各孔的吸光值。
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統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
? ? ? ???1．分析軟件 ? ??Excel，GraphPad Prism 5
? ? ? ? 2. ?數(shù)據(jù)分析?? ?
?（1）計(jì)數(shù)資料以均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，結(jié)果采用單因素方差分析（ANOVA）。
? ? ??（2）各種樣品的IC50曲線用GraphPad Prism 5軟件進(jìn)行分析生成。
? ? ? ? ? ? 樣品對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制百分比為：
??（樣品孔OD值-空白孔OD均值）/（陰性對(duì)照孔OD值-空白孔OD均值）*100%
??（3）樣品對(duì)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制百分比進(jìn)行非線性回歸分析，按以下方程進(jìn)行擬合，得到樣品的濃度-效應(yīng)依賴性曲線。
Y = 1/(1?+?10(log IC50???X)?× HillSlope)
? ? ? ? ? ? ? ? ? ??其中IC 50為抑制腫瘤生長(zhǎng)50%的樣品濃度。