大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)
產(chǎn)品名稱： 大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)
英文名稱： Western Biotechnology Inc
產(chǎn)品編號：
產(chǎn)品價格： 歡迎來電詳詢023-65316016，023—65316556
產(chǎn)品產(chǎn)地： null
品牌商標(biāo)： null
更新時間： 2023-07-31T09:56:51
使用范圍： null
大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞原代培養(yǎng)
實驗動物
SD大鼠，2周齡，若干
實驗步驟
1.無菌操作注意事項
細胞培養(yǎng)一定要保持工作區(qū)的無菌清潔，先用紫外燈和臭氧殺菌1h，然后通風(fēng)30min，操作前需要換細胞間專用拖鞋，雙手帶上一次性橡膠手套并用75%乙醇消毒，穿上實驗服，戴上一次性口罩和帽子，操作時不能大聲說話，整個無菌操作都應(yīng)該在酒精燈的周圍進行。
2.細胞生長培養(yǎng)基的制備
培養(yǎng)基在使用前需加入10%的胎牛血清和雙抗，一般為血清。培養(yǎng)基分裝成小瓶(100～200 mL)以便使用，翻帽塞塞緊瓶口。 按細胞生長需求，制備相應(yīng)的生長培養(yǎng)基。一般的細胞生長培養(yǎng)基為培養(yǎng)基+10%胎牛血清，最后按1％體積分數(shù)加入雙抗貯存液(青霉素+鏈霉素)，使青霉素和鏈霉素的終濃度分別為100 U／mL和100 U／mL。
3.大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞的分離
（1）取SD大鼠，頸椎脫臼法處死后立即用75%乙醇浸泡，移入超凈工作臺內(nèi)，用大頭針固定大鼠四肢于工作臺面的泡沫板上。
（2）碘酒擦拭四肢，再用酒精棉球擦拭，無菌條件下用滅菌消毒后的鑷子和剪刀分離出大鼠股骨和脛骨，剔除骨頭表面肌肉，PBS溶液沖洗兩遍。
（3）從中間剪斷股骨和脛骨，用2ml無菌注射器吸取DMEM/F12溶液沖出骨髓細胞多次，再用針頭吹打，吸管吸入離心管內(nèi)，1000r/min離心5min，棄上清，用PBS重懸細胞。
（4）緩慢將細胞懸液加入預(yù)先裝有5mL淋巴細胞分離液的15mL離心管內(nèi)，保持細胞懸液在淋巴細胞分離液上層，注意不要攪動液面，保持二者分層界面。
（5）2000rpm離心15-25min，離心后溶液分4層，吸取中間骨髓基質(zhì)細胞層（白色渾濁狀），PBS洗三次。
（6）用含15%胎牛血清及青鏈霉素的DMEM/F12以106/mL的細胞濃度接種于25cm2培養(yǎng)瓶中，置37℃、5%CO2恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
（7）24小時后棄去培養(yǎng)液（看細胞貼壁情況），PBS沖洗 2-3次去除未貼壁細胞，加入培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。以后每3d半量換液1次，一般10d細胞生長融合。
（8）經(jīng)0.25%胰酶消化，1：2傳代（接種密度1*105/cm2），其后一般3-5d傳代1次，選取生長良好的第三代細胞進行后續(xù)實驗。
細胞形態(tài)
骨髓間充質(zhì)細胞原代培養(yǎng)過程中，約24小時即可出現(xiàn)貼壁生長，細胞呈圓形、梭形、三角形生長緩慢。換液后細胞增殖明顯，出現(xiàn)以梭形為主的多種形態(tài)，10-14天70%-80%可融合達到傳代標(biāo)準(zhǔn)。傳代細胞形態(tài)單一，呈梭形或扁平型，增殖至細胞融合時呈漩渦狀和放射狀排列。
威斯騰生物服務(wù)流程
威斯騰生物服務(wù)項目
| 分子生物學(xué)檢測 | 蛋白質(zhì)與免疫學(xué) | 動物實驗 |
| 實時熒光定量PCR | 單克隆抗體制備 | 帕金森疾病模型 |
| 免疫共沉淀（Co-IP） | 多克隆抗體制備 | 抑郁癥動物模型 |
| ELISA（酶聯(lián)免疫吸附法）技術(shù) | Western-blot?實驗服務(wù) | 脊髓損傷模型 |
| 生化指標(biāo)檢測 | 蛋白雙向電泳實驗服務(wù) | 腦外損傷模型 |
| 雙熒光素酶報告基因檢測 | 原核蛋白表達純化 | 骨神經(jīng)損傷模型 |
| 染色質(zhì)免疫共沉淀（ChIP） | 真核蛋白表達純化 | 心肌缺血模型 |
| GST?pull?Down | ITRAQ定量蛋白質(zhì)組學(xué) | 心力衰竭模型 |
| SLAC蛋白組學(xué) | 肺動脈高血壓動物模型 | |
| 高血壓模型 | ||
| 病毒包裝 | 實驗課題整體外包 | 粥樣動脈硬化模型 |
| 過表達/干擾慢病毒包裝純化 | 整體課題外包 | 大腦中動脈阻塞模型 |
| 過表達/干擾腺病毒包裝純化 | 細胞整體實驗外包 | 慢性之氣管炎模型 |
| 逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝純化 | 動物整體實驗外包 | 過敏性哮喘模型 |
| 腺相關(guān)病毒包裝純化 | 肺炎大鼠模型 | |
| 肝炎-肝硬化-肝癌模型 | ||
| 蛋白芯片 | 原代細胞培養(yǎng) | 肝纖維化模型 |
| 細胞因子芯片 | 骨髓間充質(zhì)干細胞培養(yǎng) | 膽結(jié)石模型 |
| BioPlex懸浮芯片 | 脂肪干細胞培養(yǎng) | 急性胰腺炎模型 |
| 生長因子芯片 | 心肌成纖維細胞培養(yǎng) | 急性腎衰竭模型 |
| 炎癥因子芯片 | 軟骨細胞培養(yǎng) | 體內(nèi)血栓模型 |
| 血管生成因子芯片 | 血管內(nèi)皮細胞培養(yǎng) | 關(guān)節(jié)炎模型 |
| 凋亡因子芯片 | 神經(jīng)元細胞培養(yǎng) | I型和II型糖尿病模型 |
| 趨化因子芯片 | 內(nèi)皮組細胞原代培養(yǎng) | 裸鼠成瘤 |
| HuProt?TM?20K人類蛋白組芯片 | 基因編輯動物 | |
| 電生理相關(guān)服務(wù) | 動物整體實驗服務(wù) | |
| 膜片鉗實驗 | ||
| 細胞生物學(xué)檢測 | 高通量測序 | 代謝組學(xué) |
| 細胞原代培養(yǎng) | mRNA測序 | 氣相色譜GC/MS |
| MTT檢測 | LncRNA測序 | 液相色譜LC/MS |
| 細胞凋亡檢測 | 全基因組測序 | 核磁共震NMR |
| 細胞周期檢測 | RNA-Seq測序 | |
| 細胞克隆形成實驗 | 外顯子測序 | 影像學(xué)相關(guān)實驗 |
| Transwell細胞遷移/侵襲 | 16s擴增子測序 | Micro-CT |
| 流式分選 | Small?RNA測序 | 小動物活體成像 |
| CCK8/XTT檢測 | 宏基因組測序 | 核磁共振 |
| 臺盼藍檢測細胞活性 | 單細胞測序 | PET-CT |
| 藥物篩選細胞學(xué)實驗 | circleRNA測序 | |
| 細胞粘附性檢測 | 甲基化測序 | 基因編輯動物 |
| 細胞劃痕實驗 | 條件性敲除小鼠/大鼠 | |
| 細胞生物學(xué)整體實驗 | 全基因敲除小鼠/大鼠 | |
| 細胞成管實驗 | ||
| 病理檢測 | CRISPR/Cas9細胞敲除/敲入 | 基因芯片 |
| 掃描電鏡 | 基因定點突變細胞系 | LncRNA芯片 |
| 透射電鏡 | 單基因敲除細胞系 | miRNA芯片 |
| HE染色 | 多基因敲除細胞系 | mRNA芯片 |
| 免疫組化 | 目的基因敲入細胞系 | 甲基化芯片（限人和小鼠來源樣本） |
| Tunel（原位末端凋亡法）檢測 | 報告基因敲入細胞系 | SNP芯片（限人和小鼠來源樣本） |
| 激光共聚焦 | miRNA/LncRNA敲除細胞系 | |
| 免疫熒光 | ||
| Masson染色 | CRISPR/Cas9動物敲除/敲入 | 科研設(shè)計指導(dǎo)&文章評估/潤色 |
| 原位雜交 | 基因敲除大鼠/小鼠 | 科研文獻論著翻譯 |
| 熒光原位雜交 | 基因敲入大鼠/小鼠 | 論文翻譯潤色服務(wù) |
| 特殊染色（PSA、茜素紅、阿爾新藍等） | 臨床實驗/科研實驗設(shè)計方案指導(dǎo) | |
| 行為學(xué)檢測 | 藥物篩選服務(wù)項目 | 藥效學(xué)評價 |
| 曠場實驗 | 高通量自動藥物篩選平臺 | 抗腫瘤藥物藥效學(xué)評價 |
| 重復(fù)性刻板行為檢測 | 細胞高內(nèi)涵藥物篩選平臺 | 心血管系統(tǒng)藥物藥效學(xué)評價 |
| 動物跑臺檢測 | 蛋白質(zhì)組學(xué)靶標(biāo)研發(fā)平臺 | 泌尿系統(tǒng)藥物藥效學(xué)評價 |
| 強迫游泳 | 分子藥理研究平臺 | 內(nèi)分泌系統(tǒng)藥物藥效學(xué)評價 |
| 生物膜片鉗藥物篩選平臺 | 抗炎免疫藥物藥效學(xué)評價 | |
| 常規(guī)藥物體外篩選 |
【本平臺合作項目】
分子生物學(xué)、細胞生物學(xué)、基因敲出/入、模式動物、SPF動物保種、病理學(xué)檢測、免疫學(xué)檢測、影像學(xué)檢測、原代培養(yǎng)、細胞藥篩、CRISPR/Cas9基因編輯、基因芯片、高通量測序、蛋白組學(xué)、代謝組學(xué)、高通量高內(nèi)涵篩選、藥效學(xué)評價、藥理毒理學(xué)實驗、慢病毒包裝與穩(wěn)轉(zhuǎn)株建立、SiRNA與納米載藥、ChIP、CO-IP、生物信息學(xué)分析、知識產(chǎn)權(quán)服務(wù)！?
【全國免費熱線】400-675-6758
【電話】?023-65316016,023-65316556
【郵箱】TUNEology 波長可調(diào)檢測卡盒-->