組織單細胞制備
產品名稱： 組織單細胞制備
英文名稱：
產品編號： XSL0001
產品價格： 0.01
產品產地： null
品牌商標： null
更新時間： 2023-08-24T09:59:12
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常見的組織類型：小鼠脾臟、肝臟、心臟、肺臟、腦組織、腫瘤組織、人腫瘤組織、皮膚組織……
傳統組織處理方法： 機械法：網搓法、研磨法
適用樣本類型：脾臟、淋巴結、胸腺 網搓法
1、將300 目尼龍網扎在無菌的小燒杯上；
2、把剪碎的組織放在網上，以眼科鑷子輕輕搓組織塊，邊搓邊加生理鹽水沖洗，直到將組織搓完；
3、收集細胞懸液于離心管中，1500rpm離心5min；
4、棄上清液，加紅細胞裂解液重懸沉淀，室溫作用5min，加等體積的PBS中和后，1500rpm離心5min，棄上清，用PBS洗滌一次，再用PBS重懸，細胞計數后即可使用。
研磨法
1、先將組織剪成1-2mm大小組織塊；
2、放入組織研磨器中，轉動研棒，研至勻漿；
3、加入10ml生理鹽水，沖洗研磨器；
4、收獲細胞懸液，并經200目尼龍網過濾，1500rpm離心5min；
5、棄上清液，加紅細胞裂解液重懸沉淀，室溫作用5min，加等體積的PBS中和后，1500rpm離心5min，棄上清，用PBS洗 滌一次，再用PBS重懸，細胞計數后即可使用。
酶解法：胰蛋白酶類、膠原酶、溶菌酶、彈性蛋白酶 適用樣本類型：肝臟、腎臟、心臟、肺臟、脊髓、腦、腸道、皮膚、腫瘤等；
操作步驟：
1、先將組織剪成泥狀。
2 、用胰蛋白酶或膠原酶消化組織塊，胰蛋白酶適用千消化細胞間質較少的軟組織，如胚胎、上皮、肝、腎等組織。胰蛋白酌工作濃度一般為 0.1 %—0.5 % 。對于纖維較多的組織或較硬的癌組織常用0.25 %膠原酶，膠原酌對組織中膠原蛋白類結構消化作用強，它僅對細胞間質有消化作用而對上皮細胞影響不大。膠原酶常用濃度為0.1—0.3ug/ml ，用大于組織量30—50倍的胰蛋白酶液或膠原酶液在37°C ，搖床上消化組織，消化時間的長短依組織類型而定，一般來說，胰蛋白酶油作用 20—60 min，膠原酶需1—4h左右，一般還會加入DNA核酸內切酶。
3、消化完畢后，將細胞懸液通過200目孔徑尼龍網過濾，以除掉未充分消化的組織；
4、已過濾的細胞懸液經1500rpm離心5min后，棄上清液，加紅細胞裂解液重懸沉淀，室溫作用5min，加等體積的PBS中和后，1500rpm離心5min，棄上清，用PBS洗滌一次，再用PBS重懸，細胞計數后即可使用。
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