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?常規轉染技術可分為兩大類，一類是瞬時轉染，一類是穩定轉染（永久轉染）。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中、雖然可以達到高水平的表達，但通常只持續幾天。在轉染后24-72小時內（依賴于各種不同的構建）分析結果，常常用到一些報告系統如熒光蛋白，β-半乳糖苷酶等來幫助檢測。后者也稱穩定轉染，外源質粒DNA整合到宿主細胞染色體上，使宿主細胞可長期表達目的基因及蛋白。需要在瞬時轉染基礎上對靶細胞進行篩選或者應用高轉染效率的病毒。建立穩定的細胞系，是對靶細胞進行篩選，根據不同基因載體中所含有的抗性標志選用相應的藥物，最常用的真核表達基因載體的標志物有潮霉素（hygromycin）和新霉素（neomycin），常用G418進行選擇性篩選。篩選得到的細胞可穩定表達目的蛋白，可以用于蛋白的擴增和富集，或者得到穩定沉默特定基因的細胞株。
生博提供：載體構建服務，也可以針對構建好的外源質粒DNA進行穩定篩選。針對質粒DNA的抗性標志，選擇相應的藥物，并對所需篩選的細胞進行藥物測試，選擇細胞全部凋亡時藥物的最低濃度。瞬時轉染后，在該濃度條件下進行篩選。10-14天后，挑取單克隆，擴增后通過RT-PCR檢測mRNA表達情況或客戶提供靶基因特異性抗體，生博提供Western Blot檢測，根據蛋白表達情況，進一步篩選出穩定細胞株。
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服務流程圖
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實驗流程圖
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實驗結果
????? 穩定細胞株構建成功后，通過RT-PCR或 Western Blot鑒定篩選結果。被篩選出的穩定細胞株可以持續性表達目的基因或蛋白。同時可以根據要求為客戶提供RT-PCR結果或Western Blot結果。
部分帶有綠色熒光的穩定株
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報價與周期
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參考文獻
[1]? Grez M, Akgün E, Hilberg F, Ostertag W. Proc Natl Acad Sci. 1990 Dec;87(23): 9202- 9206.
[2]? Poeschla E, Corbeau P, Wong-Staal F. Proc Natl Acad Sci. 1996 Oct 5;93(21):11395- 11399.
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