細(xì)胞毒性檢測(cè)技術(shù)服務(wù)
產(chǎn)品名稱(chēng)： 細(xì)胞毒性檢測(cè)技術(shù)服務(wù)
英文名稱(chēng)： none
產(chǎn)品編號(hào)： 001
產(chǎn)品價(jià)格： 詢(xún)價(jià)
產(chǎn)品產(chǎn)地： null
品牌商標(biāo)： null
更新時(shí)間： 2025-03-03T17:03:53
使用范圍： null
- 聯(lián)系人 : 索萊寶-龔思雨
- 地址 : 北京市北京經(jīng)濟(jì)技術(shù)開(kāi)發(fā)區(qū)環(huán)科中路16號(hào)26幢3層301
- 郵編 :
- 所在區(qū)域 : 北京
- 電話(huà) : 181****6239 點(diǎn)擊查看
- 傳真 : 點(diǎn)擊查看
- 郵箱 : 3193328036@qq.com
- 二維碼 : 點(diǎn)擊查看
MTT 可以被線(xiàn)粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原生成結(jié)晶狀的深紫色產(chǎn)物formazan，在特定溶劑存在的情況下，可以被完全溶解，然后通過(guò)酶標(biāo)儀可以測(cè)定490nm 波長(zhǎng)附近的吸光度。細(xì)胞增殖越多越快，則吸光度越高；細(xì)胞毒性越大，則吸光度越低。CCK-8 的廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的快速高靈敏度檢測(cè)試劑盒?？捎糜谒幬锖Y選、細(xì)胞增殖測(cè)定、細(xì)胞毒性測(cè)定、腫瘤藥敏等試驗(yàn)。
樣品要求：
培養(yǎng)瓶培養(yǎng)細(xì)胞，細(xì)胞匯合度需達(dá)到70%，灌滿(mǎn)新鮮培養(yǎng)基至接近瓶口處，封口膜纏緊封口。
細(xì)胞如在凍存管中需要足量干冰寄送。
服務(wù)項(xiàng)目及收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)：
| 服務(wù)項(xiàng)目 | 收費(fèi)明細(xì) | 周期（工作日） |
| MTT | 850元/板 | 據(jù)細(xì)胞培養(yǎng)周期而定 |
| CCK8 | 950元/板 | 據(jù)細(xì)胞培養(yǎng)周期而定 |
客戶(hù)提供：
細(xì)胞（常規(guī)細(xì)胞系可由我公司免費(fèi)提供）
處理細(xì)胞所需藥物
培養(yǎng)細(xì)胞需要如使用較為特殊培養(yǎng)基或者特殊因子，也需要客戶(hù)提供
服務(wù)說(shuō)明：
MTT:
1.收集對(duì)數(shù)期細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞懸液濃度，分于96孔板，每孔180μL，3000-10000個(gè)細(xì)胞/孔。
2.置37℃、5%CO2 溫箱培養(yǎng)使細(xì)胞貼壁，培養(yǎng)6-24小時(shí)。
3.加入適當(dāng)濃度的受試化合物，繼續(xù)培養(yǎng)適當(dāng)時(shí)間。
4.小心吸去上清，加入90μL 新鮮培養(yǎng)液，再加入10μL MTT 溶液，繼續(xù)培養(yǎng)4 h。
5.然后吸掉上清，每孔加入110μL Formazan 溶解液，置搖床上低速振蕩10 min，使結(jié)晶物充分溶解。在酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀490 nm 處測(cè)量各孔的吸光值。
6.同時(shí)設(shè)置調(diào)零孔（培養(yǎng)基、MTT、Formazan 溶解液），對(duì)照孔（細(xì)胞、相同濃度的藥物溶解介質(zhì)、培養(yǎng)液、MTT、Formazan 溶解液），每組設(shè)定3復(fù)孔。
CCK-8:
一、制作標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)（測(cè)定細(xì)胞具體數(shù)量時(shí)）
1、先用細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)所制備的細(xì)胞懸液中的細(xì)胞數(shù)量，然后接種細(xì)胞。
2、按比例依次用培養(yǎng)基等比稀釋成一個(gè)細(xì)胞濃度梯度，一般要做3-5 個(gè)細(xì)胞濃度梯度，每組3-6 個(gè)復(fù)孔。
3、接種后培養(yǎng)至細(xì)胞貼壁，然后加CCK-8 試劑培養(yǎng)一定時(shí)間后測(cè)定OD 值，制作出一條以細(xì)胞數(shù)量為橫坐標(biāo)（X 軸），OD 值為縱坐標(biāo)（Y 軸）的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)可以測(cè)定出未知樣品的細(xì)胞數(shù)量（試用此標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的前提是實(shí)驗(yàn)的條件要一致，便于確定細(xì)胞的接種數(shù)量以及加入CCK-8 后的培養(yǎng)時(shí)間。）
二、細(xì)胞活性檢測(cè)
1、在96 孔板中接種細(xì)胞懸液（100μL/孔）。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)（在37℃,5% CO2 的條件下）。
2、向每孔加入10μL CCK-8 溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會(huì)影響OD 值的讀數(shù)）。
3、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4 小時(shí)。
4、用酶標(biāo)儀測(cè)定在450nm 處的吸光度。
5、如果暫時(shí)不測(cè)定OD 值，打算以后測(cè)定的話(huà)，可以向每孔中加入10μL 0.1M 的HCl 或者1%SDS(W/V)溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。在24 小時(shí)內(nèi)吸光度不會(huì)發(fā)生變化。
三、細(xì)胞增殖-毒性檢測(cè)
1、在96 孔板中配置100 μL 的細(xì)胞懸液。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)24 小時(shí)（在37 ℃，5% CO2 的條件下）。
2、向培養(yǎng)板加入10μL 不同濃度的待測(cè)物質(zhì)。在培養(yǎng)箱孵育一段適當(dāng)?shù)臅r(shí)間（例如：6、12、24 或48 小時(shí)）。
3、向每孔加入10 μL CCK-8 溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會(huì)影響OD 值的讀數(shù)）。如果待測(cè)物質(zhì)有氧化性或還原性的話(huà)，可在加CCK-8 之前更換新鮮培養(yǎng)基（除去培養(yǎng)基，并用培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次，然后加入新的培養(yǎng)基），去掉藥物影響。
4、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4 小時(shí)。
5、用酶標(biāo)儀測(cè)定在450 nm 處的吸光度。
6、如果暫時(shí)不測(cè)定OD 值，打算以后測(cè)定的話(huà)，可以向每孔中加入10μL 0.1M 的HCl 或者1%SDS(W/V)溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。在24 小時(shí)內(nèi)吸光度不會(huì)發(fā)生變化。