細胞毒性檢測技術服務
產品名稱： 細胞毒性檢測技術服務
英文名稱： none
產品編號： 001
產品價格： 詢價
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品牌商標： null
更新時間： 2025-03-03T17:03:53
使用范圍： null
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MTT 可以被線粒體內的一些脫氫酶還原生成結晶狀的深紫色產物formazan，在特定溶劑存在的情況下，可以被完全溶解，然后通過酶標儀可以測定490nm 波長附近的吸光度。細胞增殖越多越快，則吸光度越高；細胞毒性越大，則吸光度越低。CCK-8 的廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒。可用于藥物篩選、細胞增殖測定、細胞毒性測定、腫瘤藥敏等試驗。
樣品要求：
培養瓶培養細胞，細胞匯合度需達到70%，灌滿新鮮培養基至接近瓶口處，封口膜纏緊封口。
細胞如在凍存管中需要足量干冰寄送。
服務項目及收費標準：
| 服務項目 | 收費明細 | 周期（工作日） |
| MTT | 850元/板 | 據細胞培養周期而定 |
| CCK8 | 950元/板 | 據細胞培養周期而定 |
客戶提供：
細胞（常規細胞系可由我公司免費提供）
處理細胞所需藥物
培養細胞需要如使用較為特殊培養基或者特殊因子，也需要客戶提供
服務說明：
MTT:
1.收集對數期細胞，調整細胞懸液濃度，分于96孔板，每孔180μL，3000-10000個細胞/孔。
2.置37℃、5%CO2 溫箱培養使細胞貼壁，培養6-24小時。
3.加入適當濃度的受試化合物，繼續培養適當時間。
4.小心吸去上清，加入90μL 新鮮培養液，再加入10μL MTT 溶液，繼續培養4 h。
5.然后吸掉上清，每孔加入110μL Formazan 溶解液，置搖床上低速振蕩10 min，使結晶物充分溶解。在酶聯免疫檢測儀490 nm 處測量各孔的吸光值。
6.同時設置調零孔（培養基、MTT、Formazan 溶解液），對照孔（細胞、相同濃度的藥物溶解介質、培養液、MTT、Formazan 溶解液），每組設定3復孔。
CCK-8:
一、制作標準曲線（測定細胞具體數量時）
1、先用細胞計數板計數所制備的細胞懸液中的細胞數量，然后接種細胞。
2、按比例依次用培養基等比稀釋成一個細胞濃度梯度，一般要做3-5 個細胞濃度梯度，每組3-6 個復孔。
3、接種后培養至細胞貼壁，然后加CCK-8 試劑培養一定時間后測定OD 值，制作出一條以細胞數量為橫坐標（X 軸），OD 值為縱坐標（Y 軸）的標準曲線。根據此標準曲線可以測定出未知樣品的細胞數量（試用此標準曲線的前提是實驗的條件要一致，便于確定細胞的接種數量以及加入CCK-8 后的培養時間。）
二、細胞活性檢測
1、在96 孔板中接種細胞懸液（100μL/孔）。將培養板放在培養箱中預培養（在37℃,5% CO2 的條件下）。
2、向每孔加入10μL CCK-8 溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響OD 值的讀數）。
3、將培養板在培養箱內孵育1-4 小時。
4、用酶標儀測定在450nm 處的吸光度。
5、如果暫時不測定OD 值，打算以后測定的話，可以向每孔中加入10μL 0.1M 的HCl 或者1%SDS(W/V)溶液，并遮蓋培養板避光保存在室溫條件下。在24 小時內吸光度不會發生變化。
三、細胞增殖-毒性檢測
1、在96 孔板中配置100 μL 的細胞懸液。將培養板在培養箱預培養24 小時（在37 ℃，5% CO2 的條件下）。
2、向培養板加入10μL 不同濃度的待測物質。在培養箱孵育一段適當的時間（例如：6、12、24 或48 小時）。
3、向每孔加入10 μL CCK-8 溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響OD 值的讀數）。如果待測物質有氧化性或還原性的話，可在加CCK-8 之前更換新鮮培養基（除去培養基，并用培養基洗滌細胞兩次，然后加入新的培養基），去掉藥物影響。
4、將培養板在培養箱內孵育1-4 小時。
5、用酶標儀測定在450 nm 處的吸光度。
6、如果暫時不測定OD 值，打算以后測定的話，可以向每孔中加入10μL 0.1M 的HCl 或者1%SDS(W/V)溶液，并遮蓋培養板避光保存在室溫條件下。在24 小時內吸光度不會發生變化。