Transwell細胞遷移實驗/流式細胞周期檢測/Tunel檢測細胞凋亡/細胞克隆/細胞劃痕實驗
產(chǎn)品名稱： Transwell細胞遷移實驗/流式細胞周期檢測/Tunel檢測細胞凋亡/細胞克隆/細胞劃痕實驗
英文名稱： Western Biotechnology Inc
產(chǎn)品編號：
產(chǎn)品價格： 歡迎來電詳詢023-65316016，023—65316556
產(chǎn)品產(chǎn)地： null
品牌商標： null
更新時間： 2023-07-31T09:56:51
使用范圍： null
Transwell細胞遷移實驗
細胞遷移與侵襲實驗將Transwell小室放入培養(yǎng)板中，小室內(nèi)稱上室，培養(yǎng)板內(nèi)稱下室，上下層培養(yǎng)液以聚碳酸酯膜相隔，將研究的細胞種在上室內(nèi)，由于聚碳酸酯膜有通透性，下層培養(yǎng)液中的成分可以影響到上室內(nèi)的細胞，應(yīng)用不同孔徑和經(jīng)過不同處理的聚碳酸酯膜，就可以進行共培養(yǎng)、細胞趨化、細胞遷移、細胞侵襲等多種方面的研究。
實驗步驟：
材料準備：
可拍照顯微鏡，Transwell小室，孔徑8μm，沒包被膠的(Coster和Corning公司的也較常用)，Transwell遷移實驗的細胞培養(yǎng)板24孔板。細胞培養(yǎng)板應(yīng)當與購買的Transwell小室相配套，BD公司的Matrigel，無血清DMEM，(1%胎牛血清)DMEM和1640培養(yǎng)基，DMEM完全培養(yǎng)基，1640完全培養(yǎng)基（也可加到20%血清），無菌PBS，棉簽，胰酶，4%多聚甲醛固定液或者甲醇，結(jié)晶紫染液（0.1%（g/ml）PBS結(jié)晶紫）
步驟和流程
基質(zhì)膠鋪板：
用BD公司的Matrigel?1：8（根據(jù)細胞產(chǎn)生mmp的量來決定）稀釋，包被Transwell小室底部膜的上室面，置37℃30min使Matrigel聚合成凝膠。使用前進行基底膜水化。
制備細胞懸液
①制備細胞懸液前可先讓細胞撤血清饑餓12－24h，進一步去除血清的影響。但這一步并不是必須的。
②消化細胞，終止消化后離心棄去培養(yǎng)液，（用PBS洗1－2遍），用含BSA的無血清培養(yǎng)基重懸。調(diào)整細胞密度至5×105/ml。
接種細胞
①取細胞懸液100μl加入Transwell小室。
②?24孔板下室一般加入600μl含20%PBS的培養(yǎng)基，特別注意的是，下層培養(yǎng)液和小室間常會有氣泡產(chǎn)生，一旦產(chǎn)生氣泡，下層培養(yǎng)液的趨化作用就減弱甚至消失了，在種板的時候要特別留心，一旦出現(xiàn)氣泡，要將小室提起，去除氣泡，再將小室放進培養(yǎng)板。
③培養(yǎng)細胞：常規(guī)培養(yǎng)12－48h（主要依癌細胞侵襲能力而定）。24h較常見，時間點的選擇除了要考慮到細胞細胞侵襲力外，處理因素對細胞數(shù)目的影響也不可忽視。
結(jié)果統(tǒng)計
直接計數(shù)法，“貼壁”細胞計數(shù)，這里所謂的“貼壁”是指細胞穿過膜后，可以附著在膜的下室側(cè)而不會掉到下室里面去，通過給細胞染色，可在鏡下計數(shù)細胞。
取出Transwell小室，棄去孔中培養(yǎng)液，用無鈣的PBS洗2遍，甲醇固定30分鐘，將小室適當風(fēng)干。
0.1%結(jié)晶紫染色20?min，用棉簽輕輕擦掉上層未遷移細胞，用PBS洗3遍。
400倍顯微鏡下隨即五個視野觀察細胞，記數(shù)。
實驗周期：
1個月
威斯騰生物服務(wù)流程
威斯騰生物服務(wù)項目
| 分子生物學(xué)檢測 | 蛋白質(zhì)與免疫學(xué) | 動物實驗 |
| 實時熒光定量PCR | 單克隆抗體制備 | 帕金森疾病模型 |
| 免疫共沉淀（Co-IP） | 多克隆抗體制備 | 抑郁癥動物模型 |
| ELISA（酶聯(lián)免疫吸附法）技術(shù) | Western-blot?實驗服務(wù) | 脊髓損傷模型 |
| 生化指標檢測 | 蛋白雙向電泳實驗服務(wù) | 腦外損傷模型 |
| 雙熒光素酶報告基因檢測 | 原核蛋白表達純化 | 骨神經(jīng)損傷模型 |
| 染色質(zhì)免疫共沉淀（ChIP） | 真核蛋白表達純化 | 心肌缺血模型 |
| GST?pull?Down | ITRAQ定量蛋白質(zhì)組學(xué) | 心力衰竭模型 |
| SLAC蛋白組學(xué) | 肺動脈高血壓動物模型 | |
| 高血壓模型 | ||
| 病毒包裝 | 實驗課題整體外包 | 粥樣動脈硬化模型 |
| 過表達/干擾慢病毒包裝純化 | 整體課題外包 | 大腦中動脈阻塞模型 |
| 過表達/干擾腺病毒包裝純化 | 細胞整體實驗外包 | 慢性之氣管炎模型 |
| 逆轉(zhuǎn)錄病毒包裝純化 | 動物整體實驗外包 | 過敏性哮喘模型 |
| 腺相關(guān)病毒包裝純化 | 肺炎大鼠模型 | |
| 肝炎-肝硬化-肝癌模型 | ||
| 蛋白芯片 | 原代細胞培養(yǎng) | 肝纖維化模型 |
| 細胞因子芯片 | 骨髓間充質(zhì)干細胞培養(yǎng) | 膽結(jié)石模型 |
| BioPlex懸浮芯片 | 脂肪干細胞培養(yǎng) | 急性胰腺炎模型 |
| 生長因子芯片 | 心肌成纖維細胞培養(yǎng) | 急性腎衰竭模型 |
| 炎癥因子芯片 | 軟骨細胞培養(yǎng) | 體內(nèi)血栓模型 |
| 血管生成因子芯片 | 血管內(nèi)皮細胞培養(yǎng) | 關(guān)節(jié)炎模型 |
| 凋亡因子芯片 | 神經(jīng)元細胞培養(yǎng) | I型和II型糖尿病模型 |
| 趨化因子芯片 | 內(nèi)皮組細胞原代培養(yǎng) | 裸鼠成瘤 |
| HuProt?TM?20K人類蛋白組芯片 | 基因編輯動物 | |
| 電生理相關(guān)服務(wù) | 動物整體實驗服務(wù) | |
| 膜片鉗實驗 | ||
| 細胞生物學(xué)檢測 | 高通量測序 | 代謝組學(xué) |
| 細胞原代培養(yǎng) | mRNA測序 | 氣相色譜GC/MS |
| MTT檢測 | LncRNA測序 | 液相色譜LC/MS |
| 細胞凋亡檢測 | 全基因組測序 | 核磁共震NMR |
| 細胞周期檢測 | RNA-Seq測序 | |
| 細胞克隆形成實驗 | 外顯子測序 | 影像學(xué)相關(guān)實驗 |
| Transwell細胞遷移/侵襲 | 16s擴增子測序 | Micro-CT |
| 流式分選 | Small?RNA測序 | 小動物活體成像 |
| CCK8/XTT檢測 | 宏基因組測序 | 核磁共振 |
| 臺盼藍檢測細胞活性 | 單細胞測序 | PET-CT |
| 藥物篩選細胞學(xué)實驗 | circleRNA測序 | |
| 細胞粘附性檢測 | 甲基化測序 | 基因編輯動物 |
| 細胞劃痕實驗 | 條件性敲除小鼠/大鼠 | |
| 細胞生物學(xué)整體實驗 | 全基因敲除小鼠/大鼠 | |
| 細胞成管實驗 | ||
| 病理檢測 | CRISPR/Cas9細胞敲除/敲入 | 基因芯片 |
| 掃描電鏡 | 基因定點突變細胞系 | LncRNA芯片 |
| 透射電鏡 | 單基因敲除細胞系 | miRNA芯片 |
| HE染色 | 多基因敲除細胞系 | mRNA芯片 |
| 免疫組化 | 目的基因敲入細胞系 | 甲基化芯片（限人和小鼠來源樣本） |
| Tunel（原位末端凋亡法）檢測 | 報告基因敲入細胞系 | SNP芯片（限人和小鼠來源樣本） |
| 激光共聚焦 | miRNA/LncRNA敲除細胞系 | |
| 免疫熒光 | ||
| Masson染色 | CRISPR/Cas9動物敲除/敲入 | 科研設(shè)計指導(dǎo)&文章評估/潤色 |
| 原位雜交 | 基因敲除大鼠/小鼠 | 科研文獻論著翻譯 |
| 熒光原位雜交 | 基因敲入大鼠/小鼠 | 論文翻譯潤色服務(wù) |
| 特殊染色（PSA、茜素紅、阿爾新藍等） | 臨床實驗/科研實驗設(shè)計方案指導(dǎo) | |
| 行為學(xué)檢測 | 藥物篩選服務(wù)項目 | 藥效學(xué)評價 |
| 曠場實驗 | 高通量自動藥物篩選平臺 | 抗腫瘤藥物藥效學(xué)評價 |
| 重復(fù)性刻板行為檢測 | 細胞高內(nèi)涵藥物篩選平臺 | 心血管系統(tǒng)藥物藥效學(xué)評價 |
| 動物跑臺檢測 | 蛋白質(zhì)組學(xué)靶標研發(fā)平臺 | 泌尿系統(tǒng)藥物藥效學(xué)評價 |
| 強迫游泳 | 分子藥理研究平臺 | 內(nèi)分泌系統(tǒng)藥物藥效學(xué)評價 |
| 生物膜片鉗藥物篩選平臺 | 抗炎免疫藥物藥效學(xué)評價 | |
| 常規(guī)藥物體, , 外篩選 |
【本平臺合作項目】
分子生物學(xué)、細胞生物學(xué)、基因敲出/入、模式動物、SPF動物保種、病理學(xué)檢測、免疫學(xué)檢測、影像學(xué)檢測、原代培養(yǎng)、細胞藥篩、CRISPR/Cas9基因編輯、基因芯片、高通量測序、蛋白組學(xué)、代謝組學(xué)、高通量高內(nèi)涵篩選、藥效學(xué)評價、藥理毒理學(xué)實驗、慢病毒包裝與穩(wěn)轉(zhuǎn)株建立、SiRNA與納米載藥、ChIP、CO-IP、生物信息學(xué)分析、知識產(chǎn)權(quán)服務(wù)！?
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