流式細胞術檢測細胞凋亡
產品名稱： 流式細胞術檢測細胞凋亡
英文名稱： Western Biotechnology Inc
產品編號：
產品價格： 歡迎來電詳詢023-65316016，023—65316556
產品產地： null
品牌商標： null
更新時間： 2024-10-31T11:50:38
使用范圍： null
流式細胞術檢測細胞凋亡
備用試劑
1. 結合緩沖液(10X ): 0.1 M HEPES, pH 7.4; 1.4 M NaCl; 25 mM CaCl2 . 稀釋到1X 工作液備用;
2. 碘化丙碇Propidium Iodide (PI).?? 用PBS稀釋到50 μg/ml備用,建議與Annexin V-FITC聯合使用;
3. 7-AAD. 推薦與Annexin V-PE或者Annexin V-Biotin 聯合使用;
4. 1X PBS? 室溫儲存備用;
染色步驟
1、用預冷的PBS洗滌細胞兩次,之后用1X的結合緩沖液重懸細胞, 調節細胞濃度到1X106Cells/ml;
2、取100μl調節好濃度的細胞懸液到5ml流式管底部;
3、加入Annexin V標記蛋白和相應的核酸染料(標記的Annexin V與核酸染料均需要摸索到合適的使用濃度,商品化試劑盒按照說明書操作);
4、均勻混合,室溫避光反應15分鐘;(若是用Annexin V-Biotin標記蛋白染色,反應后用1X的結合緩沖液洗滌細胞一次,再加入合適濃度的標記鏈霉親和素Streptavidin,再加入合適的核酸染料,室溫避光反應15分鐘)
5、向流式管中加入400μl 1X的結合緩沖液,重懸后及時上流式細胞儀進行分析.
操作注意事項
1、補償對照管很重要;
2、細胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細胞;
3、細胞濃度與染色用的蛋白量要合適;
4、對不同藥物濃度和藥物作用時間要進行摸索;
儀器：
實驗所用的流式細胞儀為COULTER EPICS XL。
送檢樣本量：
1）單個細胞：1~2×106 個細胞左右;來源于人、小鼠、大鼠或其它。
2）外周血：EDTA或肝素抗凝全血，5ml左右;來源于人、小鼠、大鼠或其它。
1、 部分常用熒光探針，如PI等，我公司可免費提供，;特殊標記物，如CD抗體等，用戶須另行購買，也可委托我公司代購;用戶所提供抗體應可與樣本發生特異性識別反應。
2、由用戶提供的樣品或試劑所致的實驗問題由用戶負責。
附：流式細胞術檢測樣品推薦制備方法：
細胞周期、細胞凋亡及DNA倍體分析樣品（PI染色）的制備：
（1）待測樣本制成單細胞懸液，然后200g離心5分鐘，棄上清。
（2）用4℃預冷的70%冷乙醇固定，4℃保存，至少固定18小時。
（3）調整細胞濃度為106細胞/毫升，取1毫升細胞懸液，用PBS洗三次，細胞重懸于1毫升PI染液中，37℃孵育30分鐘即可進行流式分析。
（4）PI染液終濃度為50微克/毫升，RNase A終濃度為20微克/毫升。
威斯騰生物服務流程
威斯騰生物服務項目
| 分子生物學檢測 | 蛋白質與免疫學 | 動物實驗 |
| 實時熒光定量PCR | 單克隆抗體制備 | 帕金森疾病模型 |
| 免疫共沉淀（Co-IP） | 多克隆抗體制備 | 抑郁癥動物模型 |
| ELISA（酶聯免疫吸附法）技術 | Western-blot?實驗服務 | 脊髓損傷模型 |
| 生化指標檢測 | 蛋白雙向電泳實驗服務 | 腦外損傷模型 |
| 雙熒光素酶報告基因檢測 | 原核蛋白表達純化 | 骨神經損傷模型 |
| 染色質免疫共沉淀（ChIP） | 真核蛋白表達純化 | 心肌缺血模型 |
| GST?pull?Down | ITRAQ定量蛋白質組學 | 心力衰竭模型 |
| SLAC蛋白組學 | 肺動脈高血壓動物模型 | |
| 高血壓模型 | ||
| 病毒包裝 | 實驗課題整體外包 | 粥樣動脈硬化模型 |
| 過表達/干擾慢病毒包裝純化 | 整體課題外包 | 大腦中動脈阻塞模型 |
| 過表達/干擾腺病毒包裝純化 | 細胞整體實驗外包 | 慢性之氣管炎模型 |
| 逆轉錄病毒包裝純化 | 動物整體實驗外包 | 過敏性哮喘模型 |
| 腺相關病毒包裝純化 | 肺炎大鼠模型 | |
| 肝炎-肝硬化-肝癌模型 | ||
| 蛋白芯片 | 原代細胞培養 | 肝纖維化模型 |
| 細胞因子芯片 | 骨髓間充質干細胞培養 | 膽結石模型 |
| BioPlex懸浮芯片 | 脂肪干細胞培養 | 急性胰腺炎模型 |
| 生長因子芯片 | 心肌成纖維細胞培養 | 急性腎衰竭模型 |
| 炎癥因子芯片 | 軟骨細胞培養 | 體內血栓模型 |
| 血管生成因子芯片 | 血管內皮細胞培養 | 關節炎模型 |
| 凋亡因子芯片 | 神經元細胞培養 | I型和II型糖尿病模型 |
| 趨化因子芯片 | 內皮組細胞原代培養 | 裸鼠成瘤 |
| HuProt?TM?20K人類蛋白組芯片 | 基因編輯動物 | |
| 電生理相關服務 | 動物整體實驗服務 | |
| 膜片鉗實驗 | ||
| 細胞生物學檢測 | 高通量測序 | 代謝組學 |
| 細胞原代培養 | mRNA測序 | 氣相色譜GC/MS |
| MTT檢測 | LncRNA測序 | 液相色譜LC/MS |
| 細胞凋亡檢測 | 全基因組測序 | 核磁共震NMR |
| 細胞周期檢測 | RNA-Seq測序 | |
| 細胞克隆形成實驗 | 外顯子測序 | 影像學相關實驗 |
| Transwell細胞遷移/侵襲 | 16s擴增子測序 | Micro-CT |
| 流式分選 | Small?RNA測序 | 小動物活體成像 |
| CCK8/XTT檢測 | 宏基因組測序 | 核磁共振 |
| 臺盼藍檢測細胞活性 | 單細胞測序 | PET-CT |
| 藥物篩選細胞學實驗 | circleRNA測序 | |
| 細胞粘附性檢測 | 甲基化測序 | 基因編輯動物 |
| 細胞劃痕實驗 | 條件性敲除小鼠/大鼠 | |
| 細胞生物學整體實驗 | 全基因敲除小鼠/大鼠 | |
| 細胞成管實驗 | ||
| 病理檢測 | CRISPR/Cas9細胞敲除/敲入 | 基因芯片 |
| 掃描電鏡 | 基因定點突變細胞系 | LncRNA芯片 |
| 透射電鏡 | 單基因敲除細胞系 | miRNA芯片 |
| HE染色 | 多基因敲除細胞系 | mRNA芯片 |
| 免疫組化 | 目的基因敲入細胞系 | 甲基化芯片（限人和小鼠來源樣本） |
| Tunel（原位末端凋亡法）檢測 | 報告基因敲入細胞系 | SNP芯片（限人和小鼠來源樣本） |
| 激光共聚焦 | miRNA/LncRNA敲除細胞系 | |
| 免疫熒光 | ||
| Masson染色 | CRISPR/Cas9動物敲除/敲入 | 科研設計指導&文章評估/潤色 |
| 原位雜交 | 基因敲除大鼠/小鼠 | 科研文獻論著翻譯 |
| 熒光原位雜交 | 基因敲入大鼠/小鼠 | 論文翻譯潤色服務 |
| 特殊染色（PSA、茜素紅、阿爾新藍等） | 臨床實驗/科研實驗設計方案指導 | |
| 行為學檢測 | 藥物篩選服務項目 | 藥效學評價 |
| 曠場實驗 | 高通量自動藥物篩選平臺 | 抗腫瘤藥物藥效學評價 |
| 重復性刻板行為檢測 | 細胞高內涵藥物篩選平臺 | 心血管系統藥物藥效學評價 |
| 動物跑臺檢測 | 蛋白質組學靶標研發平臺 | 泌尿系統藥物藥效學評價 |
| 強迫游泳 | 分子藥理研究平臺 | 內分泌系統藥物藥效學評價 |
| 生物膜片鉗藥物篩選平臺 | 抗炎免疫藥物藥效學評價 | |
| 常規藥物體外篩選 |
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