CCK8細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)
產(chǎn)品名稱： CCK8細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)
英文名稱： CCK8
產(chǎn)品編號(hào)： HL010
產(chǎn)品價(jià)格： 10000-2500元
產(chǎn)品產(chǎn)地： null
品牌商標(biāo)： null
更新時(shí)間： 2023-09-21T16:14:31
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上海鴻立生物技術(shù)有限公司
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??? 上海鴻立生物技術(shù)有限公司擁有穩(wěn)固的技術(shù)平臺(tái)，高效的服務(wù)團(tuán)隊(duì)。以技術(shù)服務(wù)為核心為廣大客戶提供真實(shí)可靠的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，細(xì)致入微的服務(wù)。可為客戶提供IHC 免疫組化，HE染色，Tunnel凋亡，WesternBlot,免疫共沉淀Real time PCR, Elisa
免疫熒光，激光共聚焦，病毒包裝，MTT, Transwell 等單項(xiàng)實(shí)驗(yàn)服務(wù)，并有能力承接腫瘤，神經(jīng)等方面的實(shí)驗(yàn)課題，幫助客戶完成實(shí)驗(yàn)構(gòu)思，操作及英文文章潤(rùn)筆等專項(xiàng)服務(wù)
實(shí)驗(yàn)咨詢專線? 13817159308（24小時(shí)）
實(shí)驗(yàn)咨詢郵箱：baisong0727@163.com
實(shí)驗(yàn)咨詢QQ: 162472051
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實(shí)驗(yàn)步驟：
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細(xì)胞活性檢測(cè)
1.?????? 在96孔板中加入100μl細(xì)胞懸液，將培養(yǎng)板放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)（在37℃，5%CO2的條件下）。
2.?????? 向每孔中加入10μl CCK-8溶液（比例是10:1），同時(shí)設(shè)置空白對(duì)照孔。（注意不要在孔中生成氣泡，它們會(huì)影響OD值的讀數(shù)）
3.?????? 放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)0.5-4h，孵育時(shí)間的長(zhǎng)短根據(jù)細(xì)胞的類型和細(xì)胞的密度而定，可以設(shè)計(jì)時(shí)間梯度，選擇適宜的孵育時(shí)間。
4.?????? 用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定光吸收值。
5.?????? 如果暫時(shí)不測(cè)定OD值，打算以后測(cè)定的話，可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。在24小時(shí)內(nèi)吸光度不會(huì)發(fā)生變化。
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細(xì)胞增殖-毒性檢測(cè)
1．?? 在96孔板中加入100μl的細(xì)胞懸液。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)24小時(shí)（在37℃，5% CO2的條件下）。
2．?? 向培養(yǎng)板加入10μl不同濃度的待測(cè)物質(zhì)。
3．?? 將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱孵育一段適當(dāng)?shù)臅r(shí)間（例如：6、12、24或48小時(shí)）。
4．?? 每孔加入10μl CCK溶液（注意不要再孔中生成氣泡，它們會(huì)影響OD值的讀數(shù)）。
5．?? 將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時(shí)。
6．?? 用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定光吸收值。
7．?? 如果暫時(shí)不測(cè)定OD值，打算以后測(cè)定的話，可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。在24小時(shí)內(nèi)吸光度不會(huì)發(fā)生變化。
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活力計(jì)算：
細(xì)胞活力*（％）=[A(加藥)-A（空白）]/[A（0加藥）-A（空白）] ×100
A（加藥）：具有細(xì)胞、CCK8溶液和藥物溶液的孔的吸光度
A（空白）：具有培養(yǎng)基和CCK8溶液而沒(méi)有細(xì)胞的孔的吸光度
A（0加藥）：具有細(xì)胞、CCK8溶液而沒(méi)有藥物溶液的孔的吸光度
*細(xì)胞活力：細(xì)胞增殖活力或細(xì)胞毒性活力
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注意事項(xiàng)：
1.?????? 初次實(shí)驗(yàn)前，應(yīng)對(duì)接種細(xì)胞數(shù)量和孵育時(shí)間進(jìn)行摸索，找出最佳細(xì)胞數(shù)量和孵育時(shí)間。
2.?????? 細(xì)胞接種均勻，培養(yǎng)板邊孔的水分容易蒸發(fā)，因此只加PBS或培養(yǎng)基，以減少實(shí)驗(yàn)誤差。
3.?????? 檢測(cè)主要依賴脫氫酶催化反應(yīng)，如果待檢測(cè)體系中存在較多的還原劑，可在加CCK之前更換新鮮培養(yǎng)基（除去培養(yǎng)基，并用培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次，然后加入新的培養(yǎng)基），去掉藥物影響。當(dāng)然藥物影響比較小的情況下，可以不更換培養(yǎng)基，直接扣除培養(yǎng)基中加入藥物后的空白吸收即可。
4.?????? 如果沒(méi)有450nm的濾光片，可以使用吸光度在430-490 nm之間的濾光片，但是450nm濾光片的檢測(cè)靈敏度最高