大腸桿菌（E.coli）表達系統
產品名稱： 大腸桿菌（E.coli）表達系統
英文名稱： Escherichia coli (E.coli) expression system
產品編號：
產品價格： 詢價
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品牌商標： null
更新時間： null
使用范圍： null
- 聯系人 : 林經理
- 地址 : 浙江省杭州市錢江世紀城民和路481號聯合中心C座15樓
- 郵編 : 311200
- 所在區域 : 浙江
- 電話 : 180****3953 點擊查看
- 傳真 : 點擊查看
- 郵箱 : purchas@nuptec.com
一、目標基因調取或合成：
1.根據客戶指定序列設計引物或合成全基因。 2.將PCR產物克隆到T載體上，測序驗證。?交付內容：攜帶目的基因的載體10μg，含該載體的DH5α甘油菌株1ml及測序報告。
時間：2-3周
二、目標基因亞克隆：
1.擴增并抽提含有目標基因的載體質粒。 2.將目標基因亞克隆到合適的表達質粒上。 3.測序驗證構建質粒的準確性。 4.我們可免費提供部分表達載體（pET系列為主）交付內容：正確構建的重組表達質粒10μg，含重組質粒的DH5α甘油菌株1ml、測序報告、電泳圖片。
時間：2-3周
三、E.coli表達菌株轉化及篩選：
1.擴增并抽提構建好的表達質粒。 2.將表達質粒轉化到高效的E.coli表達菌株中。 3.PCR鑒定至少4個陽性克隆。 4.誘導表達4個陽性克隆，SDS-PAGE 檢測蛋白表達情況，篩選出合適菌株。 5.通過Western-blot驗證目標蛋白正確性（客戶提供抗體） 6.可免費提供表達菌株：BL21（DE3），Rosetta（DE3），Novablue等。交付內容：重組質粒的表達菌株及表達檢測報告。
時間：2-3周
四、目標蛋白表達及純化：
1.對時間，溫度以及IPTG濃度等表達條件進行優化，誘導表達目標蛋白。 2.搖瓶培養1L重組細菌，通過親和，離子交換，疏水及凝膠過濾等層析方法純化表達的重組蛋白。 3.利用蛋白酶去除不需要的純化標簽，再純化獲得所需的目標蛋白（可選，構建表達載體需加入合適的蛋白酶切位點）。 4.通過SDS-PAGE電泳檢測每步結果并控制最終產品質量。交付內容：純化好的目標蛋白5-10mg及純化報告。可按客戶要求提供含純化標簽或切除純化標簽的最終蛋白，純度最高可達95%以上。
時間：2-3周
說明：
1.如果經過多次實驗驗證由于基因特殊性目的蛋白確實不表達，向客戶交付構建好的表達載體，并收取表達載體構建、誘導表達成本費，并終止后續實驗；
2.如果最終得到的產品未達到合同要求而客戶又同意接受該產品，則雙方協商本步驟費用。?
3. 因為每個重組蛋白的表達量及純化得率都不相同，我們最終根據實際情況將給客戶提供最少5mg，最多10mg的目標蛋白，所收取的費用是相同的。
4. 我們提供的最終產品一般為保存于常規緩沖液（Tris-HCl，PBS或乙酸-乙酸鈉緩沖液）中的蛋白質溶液，并且其中不含有尿素或鹽酸胍等變性劑。但因為我們無法為每個定制的蛋白建立活性檢測系統，所以我們無法保證最終產品的生物學活性，不過我們承諾將會按照最大可能保護其活性的方法來制備目標蛋白。如果客戶一定要求目標蛋白活性，我們可以先提供約50μg純化后樣品供客戶檢測活性。若樣品活性不合格，我們不再提供目標蛋白給客戶并只收取本步驟費用的30% ，而如果樣品活性合格，我們將提供合同要求的相同質量的目標蛋白給客戶并需要加收本步驟費用的100%。
5. 每次Western-blot檢測最多8個樣品，因為要加入陽性對照，陰性對照以及Marker。本步驟只包含一次免費檢測，如果需要更多次檢測則需另收費。客戶需要提供一抗。另外由于Western-blot檢測結果受很多客觀因素影響，因此我們并不能確保檢測結果（可能會出現假陽性或是假陰性的結果）。如果結果不正常，我們可以免費重做一次。
五、目標蛋白的再加工及詳細檢測：
1：復性研究：利用多種不同復性緩沖液的體系，對目標蛋白進行小量復性試驗提供復性后樣品供客戶檢測，可根據客戶要求，按照其中一種樣品的復性條件制備小量的復性蛋白。
2：除內毒素，
3：過濾除菌，
4：凍干，
交付內容：加工后的終產品及相關實驗和檢測報告。
時間：2-3周
六、大規模制備：
按照小試工藝放大生產規模，制備客戶需要的合格蛋白產品。
交付內容：合格的目標蛋白及服務報告。
時間：協商