MTT/CCK8/XTT等細胞增殖檢測
產品名稱： MTT/CCK8/XTT等細胞增殖檢測
英文名稱： Western Biotechnology Inc
產品編號：
產品價格： 歡迎來電詳詢023-65316016，023—65316556
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品牌商標： null
更新時間： 2023-11-16T15:05:30
使用范圍： null
MTT/CCK8/XTT等細胞增殖檢測
實驗介紹
(a)?MTT
MTT為黃色化合物，是一種接受氫離子的染料。活細胞在琥珀酸脫氫酶和細胞色素c的作用下四唑環開裂，生成藍色的甲月替結晶并沉積在細胞中，甲月替結晶的生成量僅僅與活細胞數目成正比（死細胞中的琥珀酸脫氫酶消失，不能還原MTT）。還原生成的甲月替結晶可在含50%的N,N-二甲基甲酰胺、20%的十二甲基磺酸鈉（PH?4.7）或10%酸化十二甲基磺酸鈉（PH?4.7）的溶液中溶解。利用酶標儀測定490nm波長處的光密度測出OD值，即反映活細胞數目。也可利用DMSO（二甲基亞砜）來溶解。用DMSO之前要盡量去掉培養液，一遍DMSO溶解甲月替顆粒，進行比色測定。
1．取96孔細胞培養板，每孔中加0.1ml含2×104～10×104靶細胞的培養液（含10％小牛血清的RPMI-1640培養液），在37℃?5％?CO2的飽和水汽二氧化碳培養箱中培養2～3小時讓細胞帖壁（如果是懸浮細胞可直接進行下一步）
2．用RPMI-1640培養液2～10倍遞次稀釋細胞因子標準品，根據情況2～5倍遞次稀釋待檢樣品，每孔加0.1ml稀釋的標準品和待檢樣品，每個稀釋度3個重復孔。對照孔6個：3個陽性對照孔，每孔加0.1ml含大劑量細胞因子的RPMI-1640培養液，3個陰性對照孔，每孔加0.1ml?RPMI-1640培養液。在37℃?5％?CO2的飽和水汽二氧化碳培養箱中培養24～48小時或預定的時間。
3．吸去培養液，用PBS洗滌一次（如為懸浮細胞，應在吸去上清液前離心培養板）。
4．每孔加0.1ml?PBS和10μl?MTT染液，在37℃?5％?CO2的飽和水汽二氧化碳培養箱中培養4～6小時。
5．每孔加0.1ml酸化異丙醇，也可用含10％?SDS的10mmol/L?HCl代替酸化異丙醇，在振蕩器上振蕩混勻，讓還原產物充分溶解。置酶聯檢測儀上測定光密度（OD）值，檢測波長570nm，參考波長630nm。以OD值對樣品稀釋度作圖，比較標準曲線和待測樣品曲線即可求得待測樣品中細胞因子的含量。
(b)?CCK-8檢測細胞增殖（活力）：
CCK-8（cell-counting?kit-8）檢測試劑盒是應用WST-8取代MTT被還原，WST-8是一種類似于MTT的化合物，在電子耦合試劑存在的情況下，可以被線粒體內的一些脫氫酶還原生成橙黃色的formazan。WST-8產生的formazan比XTT和MTS產生的formazan更易溶解。且WST-8相較XTT和MTS化學性狀更穩定，?因此實驗結果相對更加穩定。此外，WST-8相較MTT、XTT，線性范圍相對寬，靈敏度更高。?
當細胞增殖得越多越快，則formazan產生量越多，顏色越深；反之，當內外因造成的細胞毒性越大，則顏色越淺。對于同樣的細胞，顏色的深淺和細胞數目呈線性關系。應用酶標儀測定吸光值并進行統計學計算便可以獲得細胞增殖（活性）相關數據。
(c)?XTT：
化學名：2,3-?bis(2-methoxy-4-nitro-5-sulfophenyl)-5-[(phenylamino)carbonyl]?-2H-tetrazolium?hydroxide，作為線粒體脫氫酶的作用底物，被活細胞還原成水溶性的橙黃色甲臢產物。當XTT與電子偶合劑（例如PMS）聯合應用時，其所產生的水溶性的甲臢產物的吸光度與活細胞的數量成正比。
用XTT代替MTT可省去溶解還原產物結晶的步驟，XTT可以被活細胞中的代謝酶還原成黃色水溶性的代謝產物（formazan）。代謝產物在OD450處有吸收峰。
優點：1、使用方便，省去了洗滌細胞；2、檢測快速；3、靈敏度高，甚至可以測定較低細胞密度；4、重復性優于MTT。
缺點：XTT水溶液不穩定，需要低溫保存或現配現用。
應用范圍：
生物活性因子的活性檢測；
大規模的抗腫瘤藥物篩選；
細胞增殖實驗；
藥物或基因導致的細胞毒性試驗；
藥敏試驗等。
服務周期：3周。
威斯騰實驗服務流程
| 分子生物學檢測 | 蛋白質與免疫學 | 動物實驗 |
| 實時熒光定量PCR | 單克隆抗體制備 | 帕金森疾病模型 |
| 免疫共沉淀（Co-IP） | 多克隆抗體制備 | 抑郁癥動物模型 |
| ELISA（酶聯免疫吸附法）技術 | Western-blot?實驗服務 | 脊髓損傷模型 |
| 生化指標檢測 | 蛋白雙向電泳實驗服務 | 腦外損傷模型 |
| 雙熒光素酶報告基因檢測 | 原核蛋白表達純化 | 骨神經損傷模型 |
| 染色質免疫共沉淀（ChIP） | 真核蛋白表達純化 | 心肌缺血模型 |
| GST?pull?Down | ITRAQ定量蛋白質組學 | 心力衰竭模型 |
| SLAC蛋白組學 | 肺動脈高血壓動物模型 | |
| 高血壓模型 | ||
| 病毒包裝 | 實驗課題整體外包 | 粥樣動脈硬化模型 |
| 過表達/干擾慢病毒包裝純化 | 整體課題外包 | 大腦中動脈阻塞模型 |
| 過表達/干擾腺病毒包裝純化 | 細胞整體實驗外包 | 慢性之氣管炎模型 |
| 逆轉錄病毒包裝純化 | 動物整體實驗外包 | 過敏性哮喘模型 |
| 腺相關病毒包裝純化 | 肺炎大鼠模型 | |
| 肝炎-肝硬化-肝癌模型 | ||
| 蛋白芯片 | 原代細胞培養 | 肝纖維化模型 |
| 細胞因子芯片 | 骨髓間充質干細胞培養 | 膽結石模型 |
| BioPlex懸浮芯片 | 脂肪干細胞培養 | 急性胰腺炎模型 |
| 生長因子芯片 | 心肌成纖維細胞培養 | 急性腎衰竭模型 |
| 炎癥因子芯片 | 軟骨細胞培養 | 體內血栓模型 |
| 血管生成因子芯片 | 血管內皮細胞培養 | 關節炎模型 |
| 凋亡因子芯片 | 神經元細胞培養 | I型和II型糖尿病模型 |
| 趨化因子芯片 | 內皮組細胞原代培養 | 裸鼠成瘤 |
| HuProt?TM?20K人類蛋白組芯片 | 基因編輯動物 | |
| 電生理相關服務 | 動物整體實驗服務 | |
| 膜片鉗實驗 | ||
| 細胞生物學檢測 | 高通量測序 | 代謝組學 |
| 細胞原代培養 | mRNA測序 | 氣相色譜GC/MS |
| MTT檢測 | LncRNA測序 | 液相色譜LC/MS |
| 細胞凋亡檢測 | 全基因組測序 | 核磁共震NMR |
| 細胞周期檢測 | RNA-Seq測序 | |
| 細胞克隆形成實驗 | 外顯子測序 | 影像學相關實驗 |
| Transwell細胞遷移/侵襲 | 16s擴增子測序 | Micro-CT |
| 流式分選 | Small?RNA測序 | 小動物活體成像 |
| CCK8/XTT檢測 | 宏基因組測序 | 核磁共振 |
| 臺盼藍檢測細胞活性 | 單細胞測序 | PET-CT |
| 藥物篩選細胞學實驗 | circleRNA測序 | |
| 細胞粘附性檢測 | 甲基化測序 | 基因編輯動物 |
| 細胞劃痕實驗 | 條件性敲除小鼠/大鼠 | |