基因組文庫(kù)（Genomic Library）構(gòu)建
產(chǎn)品名稱： 基因組文庫(kù)（Genomic Library）構(gòu)建
英文名稱： Western Biotechnology Inc
產(chǎn)品編號(hào)：
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產(chǎn)品產(chǎn)地： null
品牌商標(biāo)： null
更新時(shí)間： 2023-07-31T09:56:51
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?基因組文庫(kù)（Genomic?Library）構(gòu)建
簡(jiǎn)介：
用限制性內(nèi)切酶切割細(xì)胞的整個(gè)基因組DNA，可以得到大量的基因組DNA片段，然后將這些DNA片段與載體連接，再轉(zhuǎn)化到細(xì)菌中去，讓宿主菌長(zhǎng)成克隆。這樣，一個(gè)克隆內(nèi)的每個(gè)細(xì)胞的載體上都包含有特定的基因組DNA片段，整個(gè)克隆群體就包含基因組的全部基因片段總和稱為基因組文庫(kù)。基因文庫(kù)＝基因組文庫(kù)＋cDNA文庫(kù)?。??
載體的種類和特征：
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? |
受體細(xì)胞 |
結(jié)構(gòu) |
插入片段 |
舉例 |
|
質(zhì)粒 |
E.coli |
環(huán)狀 |
很小，<8kb |
pUC18/19?,T-載體,? |
|
λ噬菌體 |
E.coli |
線狀 |
9-24kb |
EMBL，λgt系列 |
|
絲狀噬菌體及噬菌粒 |
E.coli |
環(huán)狀 |
<10kb |
M13系列 |
|
粘粒載體 |
E.coli |
環(huán)狀 |
35-45kb |
? |
|
BAC |
E.coli |
環(huán)狀 |
約300kb |
? |
|
PAC |
E.coli |
環(huán)狀 |
100-800kb |
PCYPAC |
|
YAC |
酵母細(xì)胞 |
線性染色體 |
100-2000kb |
? |
|
MAC |
哺乳動(dòng)物細(xì)胞 |
環(huán)狀 |
>1000kb |
? |
|
病毒載體 |
動(dòng)物細(xì)胞 |
環(huán)狀 |
? |
SV40?載體，昆蟲桿狀病毒載體 |
|
穿梭載體 |
動(dòng)物細(xì)胞和細(xì)菌 |
環(huán)狀 |
? |
pSVK3質(zhì)粒，PBV,Ti質(zhì)粒， |
基因組文庫(kù)構(gòu)建步驟：
1、載體：?
l噬菌體：48.5kb,插入型(最多可容納9kb)、取代型(可容納?38-51kb，最適19-20kb)，?EMBL,?Charon?粘性質(zhì)粒(Cosmid)：4-6kb,?質(zhì)粒+噬菌體的性質(zhì)，可容納大片段的外源基因，最多可容納46kb。?酵母人工染色體克隆體系（YAC，Yeast?Artificial?Chromosome??Cloning?System）?插入大小200—1000kb
2、?載體DNA的制備：?高分子量的外源DNA?100-150kb載體DNA酶切反應(yīng)-----載體臂的純化-----載體脫磷處理?（常用BamHI）???（蔗糖密度梯度離心）??（堿性磷酸酶）?
3、連接和包裝：外源片段與兩臂之間的比例，包裝蛋白?4、感染宿主菌：選擇合適的宿主菌，LE392,?NM538,?NM539,?KW251等?
5、基因組文庫(kù)的保存和擴(kuò)增：?
6、測(cè)滴度，要在106fu以上
7、保存：氯仿4℃，7%?DMSO?-70℃
您需要提供：?
動(dòng)物的血或細(xì)胞、新鮮植物葉片、活體昆蟲或純化好的DNA樣品。
我們提供：
1、文庫(kù)（10%甘油菌）以及菌落效價(jià)（CFU/ml）；
2、隨機(jī)抽樣測(cè)序結(jié)果。
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