實時熒光定量PCR技術
產品名稱： 實時熒光定量PCR技術
英文名稱： L-PCR
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產品價格： 0
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?實時熒光定量PCR技術
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服務概述
實時熒光定量PCR技術即是在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程，最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。
我們為客戶提供實時熒光定量PCR全套技術服務，客戶只需提供研究材料，我們為客戶完成RNA抽提，cDNA制備，實時定量PCR，標準曲線制備及數據分析的所有步驟。本公司使用晶芯??RT-Cycler?實時熒光定量PCR儀，獨特的離心式熱循環設計和光學設計，具有超凡溫度均一性，高靈敏度、線性范圍寬、特異性好、重復性佳。可以提供的服務包括TaqMan熒光探針法和SYBR?Green熒光染料法。
服務內容
定性分析：對待測樣品進行某一特定基因的檢測。PCR反應結束后的PCR產物無需電泳檢測，可以通過Real?Time?PCR方法，簡單快速地對目的基因進行高特異性、高靈敏度的檢測，同時閉管操作的實時檢測可以有效防止反應產物的污染。本技術可以廣泛應用于病毒、病原菌等致病微生物的檢測以及各種生物品種的鑒定等。
絕對定量：對待測樣品進行某一特定基因的檢測并確定樣本基因的拷貝數。絕對定量首先必須構建與檢測樣品目的基因具有相同序列的標準品。使用已知濃度的標準品制作5個點以上的標準曲線后，可以使用標準曲線對未知濃度的檢測樣品進行絕對量（起始拷貝數）分析。
相對定量（mRNA表達量分析）：對待測樣品進行某一特定基因的檢測并確定待測基因相對于某一特定管家基因的相對表達情況。基因表達的研究一般采用相對定量的方法。相對定量法必須對樣品的目的基因和參比基因內標同時分別進行定量，然后求出對于參比基因的目的基因的相對量。通過對樣品間的目的基因的相對量進行比較，可以對不同樣品間的mRNA進行表達量分析。參比基因通常選用表達量相對恒定的管家基因，如：β-actin、GAPDH等。通過同時對參比基因的實時檢測，可以對樣品之間由于起始細胞數不同、或RNA提取效率的不同等造成的RNA量誤差進行校正，達到在嚴格意義上對樣品之間的mRNA表達量進行分析比較的目的。
檢測方法：SRBR?Green?I染料法，TaqMan探針法。
樣品要求
1.?請提供足量且新鮮的材料（大于200mg/樣品或107細胞以上），或直接提供純化好的總RNA或DNA（大于5μg/?樣品）。如果提供的材料為細胞或組織，DNA、RNA抽提費用另計；
2.?請通過?E-mail?提供已知的全長基因序列；
3.?請提供盡可能詳細的背景資料：DNA/RNA來源、豐度等。?
服務流程?
1.?引物設計與合成：根據客戶提供的目的基因及物種信息，設計、合成特異的引物和探針，并根據客戶的具體研究情況選擇適宜的內參基因；
2.?提取?DNA/?RNA，RNA定量，逆轉錄成cDNA；
3.?利用合成的引物進行普通PCR預實驗，選擇只擴增出一條特異條帶的引物進行定量PCR，制備絕對定量標準品，建立標準曲線；?
4.?進行Real?Time?PCR實驗，分析實驗結果；?
完成時間
根據合同要求時間完成。
最終產品
實驗完成后提供完整的實驗報告，包括樣品質檢報告、實驗數據分析、實驗方法及樣品的PCR擴增曲線，溶解曲線和標準曲線。
服務費用
服務過程分為兩部分：
第一部分的工作為條件的摸索和方法的建立。主要工作：根據客戶提供的資料，進行引物和探針的設計，并先合成引物，由客戶提供2-3個有效的樣品進行樣品的試擴增，并測序驗證，在此基礎上再進行探針的合成，并用該探針進行實驗條件的摸索工作。
第一部分的費用詢價。
第二部分的工作為樣品的定量工作。該工作是在完成第一部分的工作基礎上進行，包括每一個樣品的擴增定量及管家基因的擴增。
第二部分的費用按樣品數*基因收費，組織和細胞樣品費用詢價；RNA費用詢價；cDNA費用詢價。