總RNA提取
產(chǎn)品名稱： 總RNA提取
英文名稱： Extraction of RNA
產(chǎn)品編號(hào)：
產(chǎn)品價(jià)格： 詢價(jià)
產(chǎn)品產(chǎn)地： null
品牌商標(biāo)： null
更新時(shí)間： 2023-07-31T09:56:51
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實(shí)驗(yàn)介紹?
TRIZOL試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細(xì)胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質(zhì)分離，并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯仿時(shí)，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進(jìn)入水相，離心后可形成水相層和有機(jī)層，這樣RNA與仍留在有機(jī)相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開。水相層（無色）主要為RNA，有機(jī)層（黃色）主要為DNA和蛋白質(zhì)。
總RNA提取（Trizol提取）實(shí)驗(yàn)步驟
在收集到生物材料之后，最好能即刻進(jìn)行RNA?制備工作。若需暫時(shí)儲(chǔ)存，則應(yīng)以液氮將生物材料急速冷凍后，儲(chǔ)存于-80℃冷凍柜。在制備RNA?時(shí)，將存于冷凍柜的材料取出，立即以加入液氮研磨的方式打破細(xì)胞，不可以先行解凍，以避免RNase的作用。
1.?提取組織RNA?時(shí)，每50～100mg?組織用1ml?Trizol試劑對(duì)組織進(jìn)行裂解；提取細(xì)胞RNA?時(shí)，先離心沉淀細(xì)胞，每5-10?╳106?個(gè)細(xì)胞加1ml?Trizol后，反復(fù)用槍吹打或劇烈振蕩以裂解細(xì)胞；
?2.?將上述組織或細(xì)胞的Trizol裂解液轉(zhuǎn)入EP?管中,在室溫15~30C下放置5?分鐘；
?3.?在上述EP?管中，按照每1ml?TRIZOL?加0.2ml?氯仿的量加入氯仿，蓋上EP管蓋子，在手中用力震蕩15?秒，在室溫下（15℃～30℃）放置2～3?分鐘后，12000g（2℃～8℃）離心15?分鐘；
?4.?取上層水相置于新EP?管中,按照每1ml?TRIZOL?加0.5ml?異丙醇的量加入異丙醇，在室溫下（15℃～30℃）放置10?分鐘,12000g（2℃～8℃）離心10?分鐘；
?5.?棄上清，按照每1ml?TRIZOL?加1ml?75%乙醇進(jìn)行洗滌，渦旋混合，7500g（2℃～8℃）離心5?分鐘，棄上清；
?6.?讓沉淀的RNA?在室溫下自然干燥；
7.用Rnase-free?water?溶解RNA?沉淀。
【本平臺(tái)合作項(xiàng)目】
分子診斷、病理診斷、藥效學(xué)評(píng)價(jià)、毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞藥篩、動(dòng)物建模、PDX模型、CRISPR/Cas9基因編輯、病理檢測、基因芯片、蛋白組學(xué)、代謝組學(xué)、高通量測序、ChIP、CO-IP、生物信息學(xué)分析、知識(shí)產(chǎn)權(quán)服務(wù)！
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