總RNA的提取
產品名稱： 總RNA的提取
英文名稱： Extraction of total RNA
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產品價格： 0
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更新時間： 2023-09-21T16:12:31
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RNA是一種重要的遺傳信息分子，完整RNA的提取和純化，是進行Northern雜交、RT-PCR、定量PCR等RNA相關研究的重要前提。 基本步驟： 以上實驗周期是針對正常實驗樣品制定的，樣品特殊或樣品多時除外。 提供結果
1. 樣品預處理
客戶需提供新鮮的樣品或取樣后立即在低溫（-20℃或-70℃）冷凍保存的樣品，避免反復凍溶，反復凍溶會導致RNA的降解和提取量下降。
●?植物組織——液氮研磨
●?動物組織——勻漿、液氮研磨
●?培養細胞——蛋白酶K消化
●?細??? 菌——溶菌酶消化
●?酵??? 母——液氮研磨、玻璃珠破碎
2. 細胞裂解（異硫氰酸胍/苯酚法）
●?這是傳統的提取RNA的方法，適用于大部分動植物材料。異硫氰酸胍能使核蛋白復合體解離，并將RNA釋放到溶液中，采用酸性酚-氯仿混合液抽提，低PH值的酚將使RNA進入水相，而蛋白質和DNA仍留在有機相，從而完成RNA的提取工作。
3. RNA的純化（有機溶解抽提法）
●?用氯仿抽提裂解液，去除蔗糖、蛋白等雜質，并促進水相與有機相的分離。高速離心后收集水相，用0.6倍體積的異丙醇或與水相等體積的異丙醇沉淀RNA。室溫沉淀20-30分鐘，低溫高速離心，獲得RNA沉淀。用無RNase的75％乙醇洗滌RNA沉淀，干燥后用適量RNase-free ddH2O 溶解RNA沉淀。
4. RNA的檢測
●?RNA完整性檢測
用甲醛變性凝膠電泳檢測RNA的完整性。
●?RNA得率檢測
用分光光度計測定RNA溶液在260nm處的吸光值。用標準品測得在波長在260nm，1ug/mlRNA鈉鹽吸光度為0.025（光程為1cm），即OD260＝1時，樣品中RNA濃度為40ug/ml。
●?總RNA濃度（ug/ml）＝OD260×稀釋倍數×40ug/ml
5. RNA純度檢測
●?通過OD260/OD280檢測RNA純度。
●?OD260/OD280值在1.9-2.1之間，RNA的純度較好
●?OD260/OD280值小于1.8，表明蛋白雜事較多
●?OD260/OD280值大于2.2，表明RNA已經降解
價格.實驗周期
?服務項目
?樣品要求
?收費標準
?實驗周期
?細胞總RNA提取
?細胞用量：1x104—1x106個，新鮮培養（1-2天）
?100元/樣品
?5個工作日?
?組織總RNA提取
?組織用量：500mg，新鮮標本或液氮凍存的標本
?120元/樣品
?5個工作日?
?血液總RNA提取
?血液用量：5ml，新鮮或液氮凍存的標本
?120元/樣品
?7個工作日?
?菌液總RNA提取
?對數生長期的新鮮菌液1～2ml
?80元/樣品
?5個工作日?
包括總RNA的瓊脂糖凝膠電泳圖、OD值測定結果、總RNA的濃度。