腺病毒構建與包裝技術服務
產品名稱： 腺病毒構建與包裝技術服務
英文名稱： adenovirus
產品編號：
產品價格： 1000
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紅土生物技術有限公司
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????????? 腺病毒是一種無外殼的雙鏈DNA病毒，基因組長約36kb，衣殼（capsid）呈規則的20面體結構，直徑約80-110nm。衣殼含有240個六聯體（hexon）、12個五聯體（penton）及12根纖毛（fiber），除此之外還有其他一些小蛋白，如VI、VIII、IX、IIIa和IVa2等。六聯體是形成病毒衣殼20個三角形面的主要蛋白，12個頂端是5個五聯體亞單位和3個纖毛蛋白構成的復合物，12根纖毛以五聯體蛋白為基底由衣殼表面伸出，纖毛頂端形成頭節區（knob）。五聯體和纖毛的頭節區可與細胞表面的病毒受體結合，在病毒感染細胞過程中起著非常重要的作用。腺病毒的基因組以線性的雙鏈DNA形式存在，由蛋白VII和一種稱為mu的小蛋白緊密地環繞在其周圍，起到類組蛋白樣的作用。另一種蛋白V將這種DNA-蛋白復合物連接起來，并通過蛋白VI與病毒衣殼連接在一起。在兩條鏈的5′端各以共價鍵結合著一個被稱為DNA末端蛋白（pTP）復合物（DNA-TPC）的特化的結構，與腺病毒復制密切相關。腺病毒基因組的兩端各有一段100bp的反向末端重復序列（ITR），是復制的起始位點。在左端ITR的3′側有一段長約300bp的包裝信號（ψ）介導腺病毒基因組包裝入病毒衣殼。對腺病毒而言，只有包括兩端的ITR和包裝信號（ψ）的約0.5kb的序列是順式作用元件，也就是說必須由腺病毒載體自身攜帶，而其他的30余種蛋白都可以通過輔助病毒（或細胞）反式補足。
根據Journal of Gene Medicine的統計，截至2006年，在全球1192項基因治療臨床試驗方案中，有305項(26％)使用腺病毒載體，首次超過反轉錄病毒，居第一位。腺病毒易于制備、純化和濃縮，且病毒滴度可高達10^12PFU/ml，比逆轉錄病毒高出100,000倍以上。所以，它介導的基因治療常采用in vivo的方式進行，是目前基因治療臨床試驗中應用最多的一種載體。 在過去的2014年，使用腺病毒載體研究的客戶越來越多，慢慢成為一種常規的科研手段。
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紅土生物組建了專業的技術團隊開展重組腺病毒相關技術服務，提供Ad2和Ad5兩種血清型重組腺病毒載體構建、擴增、純化以及相應的技術咨詢服務，如腺病毒載體的細胞感染方法，腺病毒載體相關的動物實驗操作等。
★1、腺病毒穿梭載體的構建
客戶提供含有目的基因的原始質粒，紅土生物將該目的基因克隆至穿梭載體。
★2、腺病毒載體的同源重組
利用重組技術將目的基因的表達框從穿梭載體轉移到腺病毒載體，由于腺病毒骨架質粒與穿梭質粒分別有兩段序列相同的同源臂，同源重組后，挑取重組子進行酶切鑒定，挑選酶切鑒定正確的克隆，進行下一步腺病毒載體的包裝。
★3、腺病毒載體的包裝與擴增
將篩選到的重組腺病毒載體運用脂質體法轉染到293細胞中進行包裝，將包裝好的病毒超速離心收集，經過純化后提供給客戶至少達到1×10^12vp以上的病毒量，可直接用于干細胞和動物實驗（根據客戶需要，不同量有價格差異）
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紅土生物使用的重組腺病毒系統，除了克隆陽性率高、包裝穩定、出毒迅速、滴度高外，最大特點在于加入了調控基因，可以根據實驗需要人為調控目的基因的表達程度，另一方面，紅土生物使用的重組腺病毒系統，幾乎可以在腺病毒容量內轉入任何目的基因，具有同類產品不可比擬的優勢。
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