均一化cDNA文庫構建
產品名稱： 均一化cDNA文庫構建
英文名稱： 均一化文庫構建
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?均一化cDNA文庫構建
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服務概述
均一化cDNA文庫指原不同豐度基因的cDNA拷貝數通過DSN酶處理等方法而相互接近后構建的文庫，相對提高了細胞中大部分低豐度基因的轉錄本在文庫中的拷貝數，克服了基因轉錄水平上的差異給文庫篩選和分析帶來的障礙，大大增加了低豐度基因的檢出或克隆幾率，也因此在EST測序過程中避免了大量相同cDNA克隆的干擾。
我們對外開展高質量的均一化cDNA文庫構建服務，采用Clontech公司的CreatorTM?SMARTTM?cDNA?Library?Construction?Kit與DSN酶作均一化處理相結合的技術構建文庫。總?RNA抽提及mRNA純化是最關鍵的第一步，必須保證RNA（mRNA）的完整性和純度；其次是cDNA的均一化處理。?
樣品要求
材料要求新鮮、RNA無降解；樣品量：組織（2~3g），細胞（10?8），總RNA量50~100μg（>0.3μg/μl）或mRNA量2~3μg（>0.3μg/μl）；最低總RNA量為2~3μg（>300ng/μl），最低mRNA量為0.2~0.3μg（>30ng/μl）。其余詳見“文庫構建”中的要求。
服務流程
提取總RNA，純化mRNA，合成cDNA第一鏈，單鏈cDNA的均一化處理，合成均一化的雙鏈cDNA；或（材料有限的情況下）提取總RNA，合成cDNA第一鏈，合成雙鏈cDNA，雙鏈cDNA的均一化處理。然后將均一化的雙鏈cDNA用SfiI酶切，連接到載體，轉化或包裝，擴增及保存。
完成時間
6~8周內完成。對于有些RNA難以抽提的材料或樣品材料本身質量問題，時間較長，會在1周內和客戶協商約定時間。
最終產品
1、產物電泳圖譜；?
2、初始庫，保存在-20℃；
3、文庫評價的數據，包括庫容量，滴度，插入片段的平均長度，重組效率。庫容量：初始文庫的滴度在1?×106?以上，重組效率大于90%?；如果需要擴增，保證擴增后滴度在109?左右，庫容量大于1×105。插入片段平均長度據不同物種情況而定，植物或高等動物文庫的插入片段大于1Kb。
服務費用
詢價
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